DNase I Solution (RNase & Protease-free)

脫氧核糖核酸酶I溶液（無RNase&蛋白酶）

關鍵詞：

Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9

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產品描述

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多數細胞和組織中都能發現的一種核酸內切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點進行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從胰腺中分離而來，至今哺乳動物胰腺也是最主要的來源之一。DNase I以兩對二硫鍵結合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。

本品是即用型溶液形式的DNase I，不含RNase和蛋白酶，適用于各種RNA處理。另外還提供實驗所需的反應緩沖液和終止液，節省時間且用起來更方便。

產品應用

◇   制備不含DNA的RNA樣本；

◇   RT-PCR反應前RNA樣本內基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；

◇   T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄后DNA模板的去除；

◇   DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質相互作用；

◇   缺口平移法標記探針用；

◇   制備隨機DNA片段文庫；

◇   TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照；

產品包裝

保存與運輸方法

保存：-20℃凍存，1年穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）   本DNase I的儲存緩沖液為50mM Tris-acetate(pH 7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v) glycerol。如需對其進行稀釋，則使用本儲存緩沖液進行稀釋。

2）   酶的使用過程中需放在冰盒或冰浴內，使用結束立即放回-20℃保存。

3）  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、RT-PCR反應前RNA樣本內DNA污染的去除

1.1    DNA模板經核酸內切酶線性化，用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于適量無菌去離子水中。

1.2    往一個RNase-free EP管內依次加入下列試劑：

【注意】：如果需要處理較大量的RNA樣品，可按比例放大上述反應體系。條件許可下最好往體系內加入適量RNase抑制劑（貨號：MF0218-2KU）以防止RNA降解。

1.3    37℃孵育30min。

1.4    往上述體系內加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為1×，混勻。之后65℃孵育10min使DNase I失活?！咀⒁狻浚阂欢ㄒ燃尤?0× Stop Solution，然后再加熱失活RNase I，否則先加熱可能引起RNA被降解。

1.5    加熱處理后的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應用的模板。

二、體外RNA反轉錄后模板DNA的去除

2.1 每個含有0.5μg模板DNA的反轉錄體系中加入1U DNase I，某些情況下模板DNA完全消化所需的DNase I需通過實驗來摸索。

2.2 37℃孵育15min。

2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。

三、其他用途請參考上述方法或參考文獻等進行。

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