Benzonase Nuclease 全能核酸酶/廣譜核酸酶
（酵母重組表達，無細菌內毒素殘留，無蛋白酶污染）
【公告】：應客戶和市場需求，我司在供應真核表達無內毒素殘留全能核酸酶（#MP1509）的基礎上，新增兩款原核表達普通科研級別的全能核酸酶，一款是不帶標簽的全能核酸酶（#MP1510），一款是帶Strep Tag II標簽的全能核酸酶（#MP1511），新增產品適用于對內毒素水平無特別要求的實驗。
產品關鍵詞：
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（廣譜核酸酶）；粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen）；非特異性核酸內切酶；RIPA裂解液；DNA/RNA降解；CAS：9025-65-4；
基本描述：
Benzonase，中文名全能核酸酶，或廣譜核酸酶，一種源于粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又稱為靈桿菌）的非特異性核酸內切酶，由兩個完全一樣的亞基構成，每個亞基大約30kDa，含有245個氨基酸和兩個必需的二硫鍵?？梢郧懈詈徒到飧鞣N形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環狀，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5個寡核苷酸殘基片段，并且在很多種操作條件下有效。對核酸堿基序列無特異性要求，可在鏈內任意核苷酸間進行切割，廣泛用于去除生物制品中的核酸。
主要應用：
1、科研研究中，作為培養細胞上清和細胞裂解液去粘度的首選酶制劑，去除核酸干擾提高后續蛋白純化或功能研究；
需求背景：進行重組蛋白純化或者天然蛋白提取研究中，第一步就需要用細胞/組織裂解液如RIPA對其進行裂解釋放蛋白，此時往往伴隨著大量的基因組DNA被釋放出來，很多并不是獨立存在的，往往與核蛋白以復合物的形式存在，導致提取物非常粘稠，呈鼻涕狀。蛋白提取過程中若不能很好處理這些粘稠基因組，會造成蛋白提取效率的降低極核蛋白的丟失。傳統方法有采用超聲處理，DNase/RNase消化來降低或消除核酸影響，但由于操作的非標準化，通常難以評估此核酸清除步驟的有效性和數據穩定性。
此時，若在加裂解液的同時加入一定量的Benzonase Nuclease全能核酸酶（廣譜核酸酶），可以很好的清除粗提物中的核酸，有效降低粘度【見圖1】，提高后續操作的效率。
圖1、細胞裂解液經Benonase處理和未處理的比較圖。左管是僅加RIPA裂解液所得的離心產物，可看到鼻涕狀粘稠物懸浮在管中；右管事加RIPA裂解液和Benonase共同處理所得的離心產物，可看到上清非常透明。
2、用在生化分析樣品制備— — ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程，使用本品benonase處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，以及提高回收率。
3、疫苗工業、蛋白和多糖類制藥工業，去除宿主核酸殘留，使得疫苗和蛋白類核酸污染顯著降低至皮克級別，提供生物功效。
4、防止細胞凝聚（Cell clumping），特別是融化凍存的細胞樣品時；
應用優勢：Benonase不僅無蛋白酶活性，而且不會對健康細胞的生長造成干擾。
應用背景：全血來源的外周血單個核細胞（PBMCs）在疫苗研究中具有重要的應用價值，比如，定量疫苗誘導的T細胞反應。T細胞反應實驗最初要求新鮮分離的細胞從而達到最佳的檢測信號，這給大規模的實驗中對樣本處理提出嚴格的操作限制。然而，凍存PBMCs（尤其是從凍存血液中分離出的PBMCs）一旦融化非常容易聚集到一起，影響后續的分析。
應用示例：Smith JG et al.研究顯示Benonase（≥50 U/ml）加入PBMC融化緩沖液中有效預防細胞凝聚，從而使得PBMC冷凍保存的應用成為可能?！疚墨I來源：Smith JG et al.Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.】
Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.
產品優勢：
1、酵母重組表達，無細菌內毒素殘留?！敬蟛糠稚虡I化的Benonase都是大腸桿菌重組表達，由于自身菌株特性，不管純化方法如何，或多或少都會受細菌內毒素影響?！?/span>
2、無蛋白酶殘留，不會對蛋白本身造成干擾，影響測試結果準確性。
3、比活力高≥1.0×106U/mg蛋白【活性單位定義：在37℃，pH8.0反應條件，2.625ml反應體系中，30min內使△A260吸收值變化1.0（相當于完全消化37μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）】
4、提供兩種純度的產品：≥ 90%（SDS-PAGE），以及≥ 99%（SDS-PAGE），前者滿足最基本的科研應用，價格更經濟實惠；后者滿足生物制品要求。
5、酶活性值：≥250 U/μL。對于小體積制備物，可用稀釋緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀釋到一定濃度，再加入體系中。稀釋后溶液可4℃保存幾天維持穩定。
6、液體酶形式提供，使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。
產品使用：
本品為即用型溶液，可根據終濃度直接加入反應體系，或稀釋到一個中間濃度后直接加入反應體系【稀釋方法，見FAQs】。對于不同的應用，酶使用量有所差別，建議用量參考下表，具體實驗請做優化調整。
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實際應用 |
建議工作濃度 |
工作條件* |
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常規蛋白純化 |
25U/ml |
37℃30-60min |
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核蛋白純化 |
100U/ml |
37℃10min；4℃30min； |
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病毒純化 |
12.5U/ml |
37℃30min |
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【*】Benzonase Nuclease的有效工作溫度是0-42°C，最佳工作溫度是37℃。低溫使用酶活性有所降低，可通過 多添加2-5倍Benzonase Nuclease或延長消化時間（2-3h）來進行活力補償。 |
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產品訂購：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159。QQ：2971634497。
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
CAS NO. |
價格（元） |
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MP1509-25KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶 |
25KU |
9025-65-4 |
400 |
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MP1509-50KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶 |
50KU |
9025-65-4 |
720 |
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MP1509-100KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶 |
100KU |
9025-65-4 |
1380 |
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MP1510-25KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（不含標簽） |
25KU |
9025-65-4 |
350 |
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MP1510-100KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（不含標簽） |
100KU |
9025-65-4 |
1180 |
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MP1511-25KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（帶Strep標簽） |
25KU |
9025-65-4 |
600 |
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MP1511-100KU |
Benzonase Nuclease 全能核酸酶（帶Strep標簽） |
100KU |
9025-65-4 |
1800 |
【產品選擇指導】：
1） 不需帶標簽的全能核酸酶，且對內毒素水平要求不高（比如做蛋白結晶實驗），請選擇Benzonase Nuclease 全能核酸酶（不含標簽）（#MP1510），價格最經濟。
2） 若需帶標簽的全能核酸酶，可選擇帶Strep標簽的全能核酸酶（貨號：MP1511-25KU）或帶His標簽的全能核酸酶（貨號：MP1509-25KU）。前者滿足對內毒素水平要求不高的實驗，后者適用于要求無內毒素的實驗。
3） 若需不含內毒素污染的全能核酸酶，請選擇真核重組表達的全能核酸酶（貨號：MP1509-25KU）。
我司提供的Benzonase，比Merck、Sigma同等類型的產品性價比高很多，且基本有現貨，見下：
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品牌/名稱 |
貨號 |
規格 |
濃度 |
價格（元） |
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Merck（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
70746-3 |
10KU |
25 U/μL |
1835 |
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Merck（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
71205-3 |
25KU |
250 U/μL |
2828 |
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Sigma（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
E1014 |
5KU |
≥250 U/μL |
743 |
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Sigma（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
E1014 |
25KU |
≥250 U/μL |
2629 |
【注】：Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
相關產品：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159。QQ：2971634497。
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
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MP1501-100ML |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1502-100ML |
RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中） |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1503-100ML |
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱） |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1504-100ML |
Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1505-100ML |
NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液 |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1506-100ML |
SDS Lysis Buffer SDS裂解液 |
100ml |
225 |
現貨 |
常見問題（FAQs）：
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問1：在實驗的哪一步加入Benzonase全能核酸酶？ 答1：根據具體應用有所變化，但是總的原則是，在發酵步驟之后和蛋白收集之前加入Benzonase。 |
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問2：如何稀釋Benzonase全能核酸酶？ 答2：一般建議按照1:1000-1:20000來稀釋，具體根據實際應用濃度、反應體系、反應溫度、作用時間等參數來靈活變動。使用稀釋緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl來稀釋，4℃保存幾天穩定。最好現配現用?；蚴褂觅A存緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl, 50%甘油來稀釋到一個中間濃度，-20℃保存長期穩定。 |
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問3：Benzonase全能核酸酶是否無蛋白酶活性？ 答3：本品未檢測到蛋白酶活性，因此使用過程中不會被降解。但是樣品自身含有的蛋白酶可能會對本品造成不可逆的降解。 |
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問4：Benzonase全能核酸酶是否安全？ 答4：內部毒性測試數據，單次注射小鼠和大鼠：發現在很高濃度下都沒有毒性效應。另，極高濃度靜脈注射小鼠未觀察到致突變性。 |
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問5：為什么Benzonase全能核酸酶不工作？什么會抑制其活性？ 答5：在寬廣的作用條件下Benzonase都具有活性【見下表】，然而，1-2mM Mg2+對酶活性維持是十分必要的。Mn2+可替代Mg2+，但Benzonase只有在Mg2+存在下才能達到最佳工作活性。當單價陽離子濃度＞300mM，磷酸鹽濃度＞100mM，硫酸銨濃度＞100mM的情況下，酶活性被抑制約50%。另外，＞1mM EDTA也會抑制酶活性。
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問6：發現Benzonase全能核酸酶活性喪失，為什么？ 答6：Benzonase通常很穩定，但是某些稀少情況會發生活力損失。有幾種可能原因：由于樣品中變性劑比如蛋白酶的存在或不正確保存方法引起的不可逆酶活性喪失；由于螯合劑如EDTA存在引起可逆失活，因其去除維持酶活必須的Mg2+。 |
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問7：一不小心將Benzonase全能核酸酶置于工作臺上整周，是否能繼續使用？ 答7：Benzonase穩定性測試顯示其十分穩定。25°C（濕度60%）保存數周酶活性不受影響。 |
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問8：如何抑制Benzonase全能核酸酶活性？ 答8：操作體系中添加劑/試劑都有可能影響Benzonase活性——比如，高鹽（單價陽離子濃度＞300mM，磷酸鹽濃度＞100mM，硫酸銨濃度＞100mM）。其他已知抑制劑如螯合劑EDTA，導致Mg2+損失（EDTA＞1mM即可抑制酶活性），這一抑制可通過添加MgCl2來解除。 |
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問9：如何去除體系中的Benzonase全能核酸酶？ 答9：通過以下幾種下游的操作方法來去去除，比如澄清用的深度過濾法；TFF (Tangential ?ow filtration)；色譜純化（IEX, SEC, HIC）等。 |
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問10：Benzonase全能核酸酶與蛋白酶抑制劑cocktail兼容嗎？ 答10：兼容。但需注意很多商業化的蛋白酶cocktails含有EDTA。＞1mM EDTA會抑制酶活性。 |
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注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產品僅能用作科研用途，不可他用。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
