DNase I from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg

脫氧核糖核酸酶I (DNase I)，來源于牛胰腺

關鍵詞：

Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9

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產品描述

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多數細胞和組織中都能發現的一種核酸內切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點進行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從胰腺中分離而來，至今哺乳動物胰腺也是最主要的來源之一。DNase I以兩對二硫鍵結合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。

本品來自牛胰腺，親和色譜純化制備所得，常用于去除蛋白或RNA樣品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使標記堿基插入DNA。本品以凍干粉形式供應，比活≥500 Kunit Units/mg蛋白。

產品特性

1）   CAS NO：9003-98-9

2）   分子量：~31 kDa

3）   同義名：DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶，脫氧核糖核酸酶A

4）   活力：≥500 Kunit Units/mg 

5）   活力定義：在50μl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反應緩沖體系中，37℃，10min內完全降解1μg λ-DNA所需的酶量即為一個活力單位。此反應條件下得到的一個單位DNase活力約等于一個Kuntiz unit。

6）   激活劑：多種二價金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

7）   抑制劑：EGTA，EDTA，鹽離子濃度（＞100mM）都能降低DNase活性

8）   熱失活：含終止溶液（20mM EGTA，pH 8.0）內65℃，處理10min

9）   溶解性：溶于緩沖液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油）

保存與運輸方法

保存：凍干粉-20℃干燥凍存，至少3年穩定。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

一、   儲存液制備

將低溫保存的本品置于室溫回溫至少20min，低速短時離心后，加入適量緩沖液配制成至少≥1mg/ml儲存液（如：20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油），根據一定用量分裝置于-20℃保存，至少1年穩定。

二、   反應緩沖液制備

建議1×反應緩沖液：40mM Tris-HCl（pH 8.0）, 2.5mM (up to 10mM) MgSO4，1mM (up to 10mM) CaCl2

【注意】：當起始原料含EGTA，EDTA，其他螯合劑，和/或高濃度鹽離子，此時反應緩沖液需更高濃度的Mg2+和Ca2+。

三、使用步驟（作為參考，具體實驗可做適當調整）

2.1 往一個RNase-free PCR管內加入：1μg RNA樣本；49 μl 1×反應緩沖液；1 μl DNase I, 1 unit/ml；【注意：酶的實際比活力請見產品標簽】，混勻。

2.2 37℃孵育10-15min?！咀⒁猓合瘯r間不要超過15min或消化溫度不要高于37℃，否則殘留的RNase A污染可能會開始降解RNA】

2.3 加入1μl終止液（20mM EGTA，pH 8.0）結合Ca2+和Mg2+，之后于65-70℃失活10min，終止反應?！咀⒁猓罕仨氃跓崾Щ钪凹尤虢K止液】

注意事項

1）  在不同的反應緩沖體系內，用來完全消化一定量DNA所需的DNase I量不同，請根據具體的工作體系或實驗經驗來決定?！咀⒁猓蝴}濃度＞100mM會降低DNase I活性】

2）  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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