Calcein, AM, Ultra Pure Grade 鈣黃綠素（綠色）

點擊丨商城購買 積分領好禮

產品關鍵詞：

Calcein, AM 鈣黃綠素AM；Calcein Red 鈣黃綠素紅；TRITC；活細胞染色探針；Fluorescein diacetate (FDA)；CAS NO：148504-34-1；

產品信息                                                                                    

【好消息】：我司（懋康生物）推出鈣黃綠素系列產品，覆蓋幾種熒光光譜，滿足你對活細胞進行多重標記和功能分析的需求。不用再困惑于GFP或FITC等常用熒光素同鈣黃綠素之間的熒光重疊啦。有這么多的選擇，不用煩煩煩啦。

產品描述

Calcein, AM，中文名鈣黃綠素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一種具細胞膜滲透性的活細胞熒光染料，呈綠色熒光（Ex/Em= 490nm/515nm）。AM基團的存在不僅加強疏水性，使其能輕易穿透活細胞膜。而且封閉結合鈣離子的分子部分，本身不發熒光。一旦進入細胞后，被細胞內酯酶水解為鈣黃綠素（calcein），能與胞內鈣離子結合，產生強烈的綠色熒光。因不具有細胞膜滲透性，從而被保留在胞內。與其它活細胞染料（如BCECF-AM，CFDA）相比，Calcein, AM最適合用于活細胞染色探針，因細胞毒性很低，而且不會抑制任何細胞功能如增殖或淋巴細胞趨化性。另外，使用Calcein, AM活性檢測的實驗結果十分可信，與標準的51Cr釋放法所得結果一致。

由于死細胞缺乏酯酶，Calcein, AM僅對活細胞進行標記，這一特征使其非常適合用來檢測細胞活力和細胞的短期示蹤。常常與碘化丙啶PI聯合使用，因其僅能穿過死細胞膜的無序區域到達細胞核，嵌入細胞的DNA雙螺旋區域，并產生紅色熒光（Ex/Em= 535nm/617nm），僅對死細胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用545 nm激發，僅可觀察到死細胞。結合這些特點，Calcein, AM和PI經常被結合用作活細胞和死細胞的雙重染色。

本品以粉末形式提供，超純級別（≥95%），可與碘化丙啶PI（貨號：MX4205-10MG）聯合使用，進行活細胞和死細胞的雙重染色。

產品特性

1） CAS NO：148504-34-1

2）同義名：鈣黃綠素乙酰甲酯；3'-O-乙酰胺-2',7'-二(羧乙基)-4或5-羧基熒光素，二乙酰甲酯；

3）分子式：C46H46N2O23

4）分子量：994.86

5）純度：≥95%（HPLC）

6）外觀：白色或淺黃色結晶粉末

7）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

8）化學結構式：

保存與運輸方法

保存：-20℃干燥保存，避免強光直射，有效期一年。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3） Calcein-AM對濕度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein-AM儲存液需要分裝避光凍存，且必須緊緊密封蓋子，干燥保存。Calcein-AM工作液必須現配現用。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

A， 儲存液制備

儲存液配制范圍可為1～5 mM，具體根據工作濃度來決定，建議提前配制成1000×儲存液。若使用的工作液為5μM，那么可配制5mM的儲存液，即往50μg Calcein, AM（Mw：994.86）內加入10μl 細胞培養級別的DMSO（貨號：MS4601-100mL）即可。

B， 20% Pluronic F-127制備【可選】

稱取100mg Pluronic F-127粉末（貨號：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

C， 染色步驟

大多數實驗體系中Calcein, AM的工作濃度為2-5μM。由于不同細胞系的最佳染色條件不同，初次實驗建議做梯度實驗，以確定Calcein, AM的最佳工作濃度，以最低的探針濃度得到最好的熒光結果為篩選原則。

1） 取一管適量分裝的儲存液（1000×）置于室溫，至少回溫20min，低速離心后，用合適的緩沖液如PBS，HBSS-HEPES稀釋到1×染色工作液。

【注意】：有時可添加一定量的非離子表面活性劑如Pluronic F127到Calcein AM儲存液內來增強其水溶性。制備染色工作液前，取一管Calcein AM儲存液內加入等體積的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的終濃度為0.02%。加入Pluronic F127的Calcein AM溶液不可長期保存，需現配現用。

2） 對于貼壁細胞，先用胰酶-EDTA消化細胞，離心收集細胞（1000 rpm，3min）。對于懸浮細胞，直接離心收集細胞。

3） 去上清，用PBS（或者其他緩沖液）清洗細胞2~3次，以充分去除殘留的酯酶活性。

4） 用1/10細胞培養基體積的Calcein, AM染色工作液重懸細胞，37℃孵育15～30min。

【注意】：若細胞自身含有機陰離子轉運體，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到孵育體系內以降低Calcein泄露到胞外。

5） 用PBS（或者其他緩沖液）洗滌細胞兩次去除多余染料。

【注意】：如有必要，使用含有機陰離子轉運抑制劑的緩沖液來進行細胞清洗。用含合適濾光片（Ex/Em= 490nm/515nm）的熒光顯微鏡進行檢測。

相關產品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。