MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water)
MKRed核酸凝膠染料（效果同GelRed，DuRed）
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活動周期：2017.11.1-2017.11.15日 活動對象：僅限于生物相關行業老師（終端客戶）參加，同行業公司或代理商請勿參與。 實驗數據：只需與任何核酸凝膠染料（EB，GelRed，Goldview等）的比較實驗圖片，簡單描述實驗條件（凝膠類型，強度，染色方法），并附上你忠實的評價，即可享紅包獎勵啰。 特別聲明：本活動的最終解釋權歸上海懋康生物科技有限公司所有。 |
搜索關鍵詞：
MKRed 核酸凝膠染料；GelRed；DuRed；Ethidium Bromide, EB；Ames Test 艾姆斯試驗法；GoldView；SYBR Green I；
訂購信息： 【活動周期內按活動價執行】
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產品名稱 |
產品編號 |
規格 |
價格（元） |
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MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) MKRed核酸凝膠染料（效果同GelRed） |
MF0754-500UL |
500μl |
460 |
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MF0754-2500UL |
5×500μl |
1850 |
產品特征
□ 傳統核酸染料（Ethidium Bromide, EB，溴化乙錠）的無毒安全替代品，經艾姆斯試驗法測試認證。
□ 新型核酸染料（GelRed，DuRed）的同等優質替代品，經實驗室內部測試認證【見圖1】。
產品優勢
□ 安全無毒：獨特油性大分子，無法穿透細胞膜進入細胞；不易揮發，人體不會吸入；艾姆斯試驗法（Ames Test）表明凝膠染色濃度下完全沒有誘變性，與EB的強致癌性相比，是一種安全無毒的核酸染料。
□ 適用范圍廣：適用于瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳的dsDNA, ssDNA以及RNA染色。
□ 操作靈活簡單：可選擇電泳前（膠染法）或電泳后（泡染法）染色。使用方法同EB，GelRed，DuRed
，不用重新適應和摸索新的電泳和染色條件。
□ 檢測方便：與EB具相同的光譜特征，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀即可，無需更改濾光片和觀察裝置。標準EB濾光片或SYBR濾光片都適用。
□ 靈敏度高，對核酸遷移影響?。?/span>適用于各種大小片段的電泳染色。電泳條帶不易完全，片段不易遷移，不像SYBR Green I，染料濃度高時會引起條帶彎曲和遷移現象【見附件常見核酸染料的性能比較】。
□ 穩定性高：室溫穩定保存一年，長期不用可置于+4℃保存二年。
□ 易去除，兼容性強：用酚/氯仿提取和乙醇沉淀，或商業化的膠回收試劑盒可輕易去除核酸中的染料；與常見的下游應用如克隆，連接和測序兼容。
應用示例：
圖1. GelRed（Biotium）與MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比較。1-6是不同上樣量的Marker III（依次為100ng、50ng、12.5ng、6.25ng、3.125ng）；7-11是不同上樣量的血液基因組DNA（依次為200ng、150ng、100ng、50ng、25g）。凝膠配制條件：往25ml凝膠溶液加入0.25g瓊脂糖，微波爐加熱至充分溶解，冷卻至60℃左右，加入2μl GelRed或MKRed染料，混勻，倒膠。電泳條件：1%瓊脂糖凝膠，150V，20min。
圖2. EB（MPbio, USA）與MKRed（MKbio, Shanghai）的使用比較。1-5是不同管菌液的PCR產物（目的片段500bp左右）。凝膠配制條件：往20ml凝膠溶液加入0.2g瓊脂糖，微波爐加熱至充分溶解，冷卻至60℃左右，加入2μl EB或MKRed染料，混勻，倒膠。電泳條件：1%瓊脂糖凝膠，150V，25min。
常見問題
1. MKRed能用于ssDNA或RNA染色嗎？
回復：MKRed能用于ssDNA和RNA染色，但對dsDNA的檢測靈敏度比ssDNA或RNA高2倍。
2. MKRed與下游應用如克隆，連接或測序兼容嗎？
回復：是的，建議用酚-氯仿提取和乙醇沉淀，或用商業化的膠回收試劑盒來去除DNA中的染料。
3. MKRed與什么上樣緩沖液兼容？
回復：我們一般使用6×上樣緩沖液（含15%甘油，7.5% Ficoll 400，0.05%溴酚藍和0.1% Patent Blue VF）。上樣緩沖液中若含SDS，可能會引起預制MKRed凝膠內的核酸條帶發生彌散。若發生這種情況，建議使用泡染色對核酸染色。
4. 是否能將MKRed加入DNA中，然后進行電泳檢測？使用濃度多少？
回復：可以，使用濃度0.5×即可。但我們推薦用膠染法或泡染法來檢測，能保證得到理想結果。
5. 哪種發射濾片適用于MKRed？
回復：使用EB濾片成像即可。SYBR濾片也能用于成像并得到較好的結果。
6. 電泳后的MKRed預制膠能重復使用？
回復：不建議如此使用，因再次電泳信號降低很明顯。
7. MKRed的工作原理是什么？化學結構是什么？
回復：工作原理是通過專一嵌入并結合DNA?；瘜W結構不對外公開。
8. 電泳過程中MKRed會發生遷移嗎？
回復：和EB一樣，MKRed不會遷移。沒有必要加染料到電泳緩沖液中，用MKRed染色的凝膠比EB更加均化。
9. MKRed需要避光使用嗎？
回復：MKRed非常穩定?？稍谑覂裙庀率褂?，但染料建議避光保存。
10. 不小心將MKRed暴露在室內光下，是否還能用？
回復：建議MKRed避光長期保存。有客戶不小心將其暴露在室內光下一個月，MKRed仍能很好的染色。
11. MKRed能用于甲醛、聚丙烯酰胺、DGGE、EMSA或PFGE凝膠？
回復：是的。有文獻報道用MKRed的同類染料GelRed對乙二醛和甲醛瓊脂糖凝膠進行RNA電泳染色（膠染法）。用泡染法對聚丙烯酰胺、DGGE和EMSA凝膠染色。對PFGE凝膠可用膠染法或泡染法。
12. MKRed能用于彗星實驗（COMET assay）？
回復：是的，可用泡染法來染色。
保存：+4℃避光干燥保存，2年有效。
運輸：室溫運輸。
注意事項
1） MKRed雖為安全無毒的核酸染料，對人無傷害，但請科研人員操作過程中注意防護，盡量避免與染料的直接接觸。且染料的廢棄需符合當地規定。
2） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
一、膠染法（同EB，電泳前染色）
1. 制膠時加入MKRed 核酸染料（每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μLMKRed 10,000×水溶液）。
2. 按照常規方法進行電泳。
3. 用普通紫外凝膠透射儀（300nm處有最佳激發）觀察以及標準EB濾光片成像。
1) 此方法比較節省染料，500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
2) 由于MKRed具有良好的熱穩定性，可以直接添加到熱的瓊脂糖溶液中而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將MKRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。
3) MKRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
4) 含有染料的預制凝膠溶液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
5) 如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時間以保證邊緣清晰；改進上樣技巧或選擇泡染法染色。
6) 膠染法不適合預制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。
二、泡染法（電泳后染色）
1. 按照常規方法進行電泳。
2. 用H2O將MKRed 10,000×水溶液稀釋約3,300倍制成3× 染色液（例如：將15μL MKRed 10,000×水溶液和5mL 1M NaCl混合，之后加到45mL H2O中混勻）?！咀⒁狻浚喝旧褐屑尤?.1M NaCl能提高靈敏度，但如果膠染色再次使用會比較容易有沉淀產生。
3. 將凝膠小心地放入合適的容器中，緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，最佳染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10％丙烯酰胺的聚丙烯酰胺凝膠，染色時間通常介于30min-1h，丙烯酰胺含量增加，染色時間延長。
4. 不需要脫色，但若有需要可用水清洗一下凝膠以降低背景。
5. 用普通紫外凝膠透射儀（300nm處有最佳激發）觀察以及標準EB濾光片成像。
【注意】
1） 用泡染法染色時，染料用量較多。單次使用的染色液可重復使用3次左右。
2） 3× MKRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
常用核酸染料的性能比較
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產品貨號 |
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靈敏度 |
高 |
高 |
低 |
低 |
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穩定性 |
高 |
低 |
高 |
高 |
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對核酸遷移的影響 |
條帶不易彎曲，片段不易遷移 |
染料濃度高時，條帶易完全，遷移現象明顯 |
條帶不易彎曲，片段不易遷移 |
條帶不易彎曲，片段不易遷移 |
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安全性 |
獨特油性大分子，不揮發升華，不易吸入人體，不能穿透細胞膜，安全無毒。Ames Test表明染色濃度完全無誘變性，無致癌毒性。 |
花箐染料，能穿透細胞膜，但容易生物降解，不會在體內殘留，安全無毒。 |
主要成分為吖啶橙，一種煤焦油提取物，具高毒，致癌，高誘變性。 易揮發升華，易吸入人體，能進入活細胞，不易被生物降解，長期留在體內。 |
分子量小，易揮發升華，易吸入人體，不易生物降解，體內長期殘留。Ames Test表明容易引起突變，是強誘變劑，高致癌性。 |
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適用性 |
通用大小片段電泳染色。 與EB具相同的光譜特性，無需更改濾光片和觀察裝置。標準EB濾光片或SYBR濾光片都適用，使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可，300nm處得最佳激發。 |
100bp以上電泳染色。適用于254nm激發的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
100bp以上電泳染色。使用254nm激發的紫外凝膠透射儀或可見光凝膠透射儀觀察。 |
100bp以上電泳染色。使用普通紫外凝膠透射儀觀察即可。 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
