SYBR Green I (10,000×in DMSO) 核酸凝膠染料

產品標簽

GoldView；Acridine Orange 吖啶橙；GelRed；DuRed；GelGreen；溴化乙錠（EB）；SYBR Green I；

產品信息

產品描述

SYBR Green I，是目前檢測瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠中dsDNA最靈敏的染料之一，最低檢出限為20pg DNA（254nm紫外發射光），60pg DNA（300nm透射光）；還可用于寡核苷酸檢測（1-2ng，300nm透射光），比溴化乙錠EB的靈敏度高50-100倍。

SYBR Green I檢測凝膠中核酸的非凡靈敏度歸因其獨特的染料特性：①SYBR Green I具有超強的DNA結合力，與DNA結合后熒光顯著增強—至少比EB高出一個數量級；②DNA/SYBR Green I復合物的熒光量子產率（~0.8）比DNA/EB（~0.15）高5倍多；③SYBR Green I在瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中迅速滲透，在缺乏DNA時背景熒光可忽略，讓染色步驟快速，且成像之前無需脫色。

SYBR Green I因與DNA結合能力強，既能在電泳前（預染），也能在電泳后（后染）對DNA進行染色。還可對毛細管電泳分離的DNA進行染色。SYBR Green I與DNA的結合不會抑制多種常見的限制性內切酶活性，包括Hind III和EcoR I，可直接進行消化或連接。用于瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA后，還可直接將DNA轉移到膜上，進行后續的核酸印跡雜交分析。

本品為溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料,電泳級。

保存與運輸方法

保存：-20°C避光干燥保存，1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1. 獨立實驗室進行的艾姆斯試驗表明SYBR Green I的致突變性明顯比EB要低很多。但是，必須警告用戶注意，目前尚無關于SYBR Green I對人體的致突變性或毒性的數據。由于該染料與核酸結合，應當被看作潛在誘變劑，使用時要小心謹慎。在處理DMSO儲存液時應特別小心，因DMSO能促進有機分子進入組織。染料的廢棄處理應當符合當地的規定。

2. SYBR Green I對dsDNA的檢測靈敏度非常高（20pg，254nm紫外發射光），但對ssDNA和RNA的靈敏度稍低（100-300pg，254nm紫外發射光），使之成為復雜溶液中檢測dsDNA的理想選擇。尤其是復雜溶液中的ssDNA和RNA可能會掩蓋結果的時候，如凋亡特有的連續梯度條帶apoptosis ladders。

3. SYBR Green I的最大激發波長為497nm，但在～290nm和～380nm處有二級激發峰。與DNA結合的SYBR Green I的熒光發射集中在520nm。這些光譜特性讓SYBR Green I適用于多種凝膠檢測儀，從紫外反射（上紫外）和透射儀（下紫外）到氬離子激光器和水銀燈激發的凝膠掃描儀。

4. 預染色方法，電泳時間不要超過2h，否則SYBR Green I會從DNA上脫離出來，產生彌散狀條帶。

5. 紫外照射透視下，與dsDNA結合的SYBR Green I呈綠色熒光。如果膠中含ssDNA，則熒光顏色為橘黃色而不是綠色。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、使用前準備工作

使用前將本品取出并回溫至室溫，使DMSO徹底解凍、溶液均一。于離心機上短暫離心確保所有溶液到管底。第一次使用時可將本品分裝成多個小份后凍存，小份染料能更快溶解。

二、染色方法

1．電泳后的DNA染色（后染）

1）在瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳。

【注】：TBE和TAE緩沖液均適合于SYBR Green I染色。

2）用TE、TAE或TBE緩沖液將SYBR Green I儲存液進行1:10,000倍稀釋。

【注】：

①SYBR Green I染色對pH敏感，為獲得最佳的靈敏度，應確認在染色溫度下染色液的pH值在7.5- 8.0之間（pH8.0更佳）。

②用水配制的染色液不如用緩沖液配制的穩定，為確保最大的染色靈敏度，必須在24h內使用。此外，用pH低于7.5或高于8.0的緩沖液配制的染色液也不太穩定，染色效率有所下降。

3）染液要充分覆蓋凝膠，室溫輕搖孵育10-40min。

【注】：

①推薦用塑料而不是玻璃容器來儲存染色液，因染料會吸附到玻璃表面。

②染色過程避光進行，建議在容器上加蓋鋁箔或置于暗處。

③凝膠厚度及瓊脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同，染色時間將有所不同。

④無需脫色。

⑤染色液可置暗處（最好是冷藏）放置1周或更久，重復使用最多4次。

2．電泳前的DNA染色（預染）

1）配制成SYBR Green I預制凝膠

臨灌膠前將SYBR Green I儲存液按照1:10,000倍稀釋到凝膠溶液中，預制成含有SYBR Green I染料的瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠。電泳結束后即可在適合的凝膠成像儀下檢測?！绢A染推薦用此法】

預制的SYBR Green I凝膠的DNA檢測下限（大約為30-40pg/條帶），可能略高于電泳后染色（＜20pg/條帶）。此外，在SYBR Green I凝膠中的DNA片段遷移率明顯比無染料凝膠中的相同片段慢。

2）作為DNA模板預染標記

一般而言，DNA在電泳前與染料工作液（1:10,000倍稀釋）至少孵育15min。

三、凝膠成像（紫外或藍光透射儀或紫外頂置光源直射）

可在紫外或藍光光源下輕松觀察到用SYBR Green I染色的DNA。

四、從dsDNA中去除SYBR Green I

使用簡單的乙醇沉淀能從dsDNA中去除99%以上的SYBR Green I染料。

將SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl，加入2.5倍體積的無水或95%的乙醇。在冰上孵育約20min，4℃離心至少10min。去除乙醇，并用70%乙醇洗滌沉淀。讓乙醇揮發，并用TE重懸雙鏈DNA。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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