RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（強）

產品標簽：

RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液；細胞/組織裂解液；總蛋白提??；BCA蛋白濃度檢測試劑盒；Bradford蛋白濃度測定試劑盒；PMSF；

產品信息

【溫馨提示】：見我司懋康生物（MKBIO）整理的組織/細胞裂解液重要特點以及選擇指南。

產品描述

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），本意為Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統的細胞組織快速裂解液，對組織和細胞都有較好的裂解作用。RIPA的配方有很多種，根據其裂解強度的不同，大致可分為強、中、弱三類，應用上會有一些差異【見附表1】。

本品為裂解性較強的1×RIPA裂解液，主要成分為50mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100,1%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS，以及正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑，可廣譜且有效抑制蛋白降解，經本品裂解所得的蛋白樣品，適用于蛋白免疫印跡（Western Blot），免疫沉淀（IP）等實驗。經本品裂解收集的蛋白樣品，可使用增強型BCA蛋白濃度測定試劑盒（貨號：MP1902-500T）測定總蛋白濃度。由于本品含有較高濃度的去垢劑，不適合用Bradford法來測定總蛋白濃度。

產品組成

保存與運輸方法

保存：-20℃凍存，1年穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）  為了取得最佳的使用效果，建議第一次使用本品的時候將裂解液分裝凍存，避免反復凍融。

2）  裂解樣品的所有步驟需在冰上或4℃進行。

3）  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

A，培養的細胞樣品

1）  充分融解RIPA裂解液，之后混勻。取適當量的裂解液，使用前數分鐘內加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最終濃度為1mM。

2）  貼壁細胞：吸除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可忽略此步）。按照六孔板的每孔細胞加入150-250μl裂解液的比例加量。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

       懸浮細胞：離心收集細胞，用手指彈散細胞。按照六孔板的每孔細胞加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

3）  充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、WB和免疫沉淀等實驗。

【裂解液用量說明】：通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠，如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200μl或250μl。

B， 組織樣品

1）  將組織剪切成細小的碎片，使用勻漿儀進行勻漿。

2）  充分融解RIPA裂解液，之后混勻。取適當量的裂解液，使用前數分鐘內加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最終濃度為1mM。

3）  按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加量?！咀⒁猓喝绻呀獠怀浞挚梢赃m當添加用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可適當降低用量?！?/span>

4）  充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、WB和免疫沉淀等實驗。

5）  如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過高強度的漩渦混勻器使樣品裂解充分，之后使用相同步驟操作。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分。

【注意】：RIPA裂解液的裂解產物經常會出現一小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散這些透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。像檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kB、p53，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。  

附表1. 三種RIPA裂解液（強、中、弱）組分和應用差異