?? 載體：A23187 / 4-bromo-A23187 /Ionomycin

?? 探針：Fluo-3, AM/Fluo-4, AM/Rhod-2, AM/Rhod-4, AM（可見光激發）

?? 探針：Fura-2, AM/Indo-1, AM（紫外光UV激發）

?? 螯合劑：EGTA（金屬螯合劑）

搜索關鍵詞：Calcium Ionophore 鈣離子Ca2+載體；Calcium Indicators 鈣離子指示劑；Visible light-excitable 可見光激發；UV-excitable紫外光激發；Ionomycin離 子霉素；Fluo-3, AM CAS: 121714-22-5；Fura-2, AM CAS:108964-32-5;

背景描述：

鈣（Calcium）是一種重要的且普遍存在的第二信使，參與調控各種各樣的細胞過程，包括細胞增殖，基因轉錄，肌肉收縮和胞吞作用。響應于大量的刺激物，鈣離子（Ca2+）從胞內的儲存池釋放出來；而胞內Ca2+濃度的增加會引起細胞功能的活化、調節和終止。許多泵和離子通道都允許這種獨特的陽離子進入和離開細胞，并且在細胞質和胞內蓄池間移動。

我司（懋康生物，MKbio）提供各種優質的指示劑/探針來檢測Ca2+釋放；Ca2+螯合劑和離子探針用做對照，以檢測鈣離子信號通路調控的酶活性。

? A1. 鈣離子載體（Ca²⁺ ionophores）基本介紹

1. A23187（CAS NO：52665-69-7），由于能夠非常明顯的提高二價陽離子穿透生物膜，呈現出離子載體（ionophore）特性。A23187對Ca2+具有高度的選擇性，因此常用來增加完整細胞的胞內Ca2+水平，進而研究胞內Ca2+介導的生理事件。含內源性的UV激發的自熒光，不能與UV激發的Ca2+指示劑聯合使用，比如：Fura-2。但仍可與長波長激發的鈣離子指示劑，如Fluo-2聯合使用。 

2. 4-Br- A23187（CAS NO：76455-82-8），高度選擇性的Ca2+載體，能夠提高胞內Ca2+水平。通常用做熒光探針確定胞內Ca2+水平的校準標準品（calibration standard），用來平衡胞內外的Ca2+水平，以及運載Mn2+進入細胞以淬滅胞內探針的熒光。作為抗生素A23187的鹵化衍生物，基本沒有內源熒光，可與UV激發的Ca2+指示劑如Fura-2，Indo-1，Quin-2，以及可見光激發的指示劑如Fluo-4，Fluo-3，Rhod-2聯合使用。還能用來平衡胞內外Mg2+濃度，適合校準Mg2+指示劑。 

3. 離子霉素（Ionomycin，CAS：56092-81-0），一種有效的Ca2+載體，通常用來校準熒光Ca2+指示劑以及修飾胞內Ca2+濃度，以及用在對細胞過程中Ca2+的調控特性的研究中；

? A2. 鈣離子載體訂購信息：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 楊先生。

? B1. 可見光激發鈣離子指示劑（Visible-lightexcitable Ca²⁺ indicators）的優勢

與紫外光激發的熒光探針相比，如Fura-2和Indo-1，可見光激發Ca2+探針具有以下特點：

1）適用于大多數的激光共聚焦鈣離子濃度檢測系統，包括共聚焦激發掃描顯微鏡以及流式細胞儀等。

2）具有更強的染料吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測Ca2+變化，從而降低了對活細胞的光毒性。

3）Ca2+依賴性熒光強度增強，對Ca2+變化水平檢測敏感度更高。

4）降低樣品自熒光以及光散射的干擾。

5）兼容光激活探針以及UV-激發試劑，因此更方便于多參數檢測。

6）無光譜偏移。

? B2. 常見的幾種可見光激發鈣離子指示劑基本介紹

1. Fluo-3, AM（CAS NO：121714-22-5），常用的可見光激發波長Ca2+熒光探針，具有較高的Ca2+捕獲能力，通過熒光強度的變化直接反映Ca2+信號的動力學變化。當Fluo-3以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但一旦與Ca2+結合即可產生很強的熒光，熒光信號增強60~80倍，此時的最大激發波長為506nm，最大發射波長為526nm?？赏ㄟ^激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀等來檢測胞內鈣離子水平的變化。 

2. Fluo-4, AM（CAS NO：273221-67-3），Fluo-3的改良版本，通過將Fluo-3結構上的氯離子（Cl-）替換為電子吸引力更強的氟離子（F-），使得最大激發波長往短波長偏移10nm左右。正由于這個波長更接近氬激光器的波長，則當使用氬激光器來激發探針Fluo-4，能夠得到更強的熒光強度，比Fluo-3強一倍。另外，Fluo-4的Ca2+親和力幾乎接近Fluo-3（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM），因此，使用上幾乎同Fluo-3。Ca2+結合后的最大激發波長為494nm，最大發射波長為516nm。 

3. Fluo-8, AM，目前最亮的可見光激發波長Ca2+熒光探針，其熒光強度比Fluo-4強兩倍，比Fluo-3強四倍。 

4. Rhod-2, AM（CAS NO：129787-64-0），一種高親和力的可見光激發波長Ca2+熒光探針。類似于Fluo-3或Fluo-4，其激發和發射光譜不會隨著Ca2+濃度變化發生明顯的遷移，熒光信號一旦與Ca2+結合后明顯增強。不同于Fluo-3或Fluo-4，Rhod-2的波長更長（Ex/Em=549/578 nm，Ca2+結合），這一特性使其更適合具高水平自熒光信號細胞或組織的Ca2+水平檢測，還可用來檢測由光感受器和籠鎖Ca2+螯合劑光激活導致的Ca2+釋放。

? B3. 可見光激發鈣離子訂購信息: 更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 楊先生。

? C1. 紫外光激發鈣離子指示劑（UV-excitable C a²⁺ indicators）基本介紹

1. Fura-2, AM（CAS NO：108964-32-5），一種常用的紫外光激發和比率測定型Ca2+熒光探針。一旦與Ca2+結合后，Fura-2的最大激發波長發生藍色遷移，由原來的363nm（Ca2+-free）遷移到335nm（Ca2+-saturated），而最大發射波長基本未變化，保持在510nm左右。通常情況，分別用最大激發波長340nm和380nm來激發Fura-2，且用340/380nm激發下的熒光比值來檢測細胞內Ca2+濃度。使用比值檢測，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。 

2. Indo-1, AM（CAS NO：112926-02-0），一種常用的紫外光激發和比率測定型Ca2+熒光探針。一旦與Ca2+結合后，Indo-1的最大發射波長向短波長遷移，由原來的475nm（Ca2+-free）遷移到401nm（Ca2+-saturated），而最大激發波長無明顯變化，維持在346nm~ 330nm范圍內，適宜用氬離子激發器的UV激發光譜（351~364nm）進行熒光激活。因此，不同于Fura-2，Indo-1是發射波長率圖Ca2+熒光探針，特別適合流式細胞儀檢測，因其可在控制單一激發波長的條件下輕易調整發射濾片，也特別適合多色熒光檢測。使用發射波長下熒光強度的比率來測定細胞內Ca2+濃度，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。實際檢測，推薦使用最大發射波長分別用405nm和485nm。

? C2. 紫外光激發鈣離子指示劑訂購信息: 更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 楊先生。

? D1. 鈣離子螯合劑（EGTA）基本介紹

EGTA，英文名Ethylene Glycol Tetraacetic Acid，中文名乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸，CAS：67-42-5，各種緩沖液中的一種重要化學試劑。最廣泛使用的一種鈣離子螯合劑，可在鎂離子Mg2+存在情況下，用來測定鈣離子，因鈣離子Ca2+-EGTA復合物的穩定性約比Mg2+-EGTA復合物強100,000倍?？捎脕碇苽溻}離子緩沖液和調控鈣離子濃度。

常在鈣離子載體如Ionomycin（離子霉素）存在的條件下，使用CaEDTA buffer原位校準細胞內鈣離子指示劑。

? D2. 鈣離子螯合劑（EGTA）產品訂購：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 楊先生。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。