Fluo-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純

— — Ca²⁺綠色熒光探針Fluo-3的升級版本

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Fluo-4 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級純；Fluo-4,Acetoxymethyl Ester; 可見光激發波長 Ca ²⁺熒光探針；Fluo-3；Fluo-8, AM；Rhod-2, AM；CAS NO：273221-67-3；

Fluo-4是可見光激發波長Ca2+熒光探針Fluo-3的改良版本，通過將Fluo-3結構上的氯離子（Cl-）替換為電子吸引力更強的氟離子（F-），使得最大激發波長往短波長偏移10nm左右。正由于這個波長更接近氬激光器的波長，則當使用氬激光器來激發探針Fluo-4，能夠得到更強的熒光強度，比Fluo-3強一倍。另外，Fluo-4的Ca2+親和力幾乎接近Fluo-3（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM），因此，使用上幾乎同Fluo-3。Ca2+結合后的最大激發波長為494nm，最大發射波長為516nm?？赏ㄟ^激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀來檢測胞內鈣離子水平的變化。

Fluo-4, AM是Fluo-4的一種乙酰甲酯衍生物，具有細胞膜滲透性，只需簡單培養，即可輕易進入細胞。一旦進入細胞內，即被其內酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fluo-4，從而滯留在胞內以發揮相應生理功能。

可見光激發Ca2+熒光探針的優勢：

與紫外光激發的熒光探針相比，如Fura-2和Indo-1，可見光激發Ca2+探針具有以下特點：

1）適用于大多數的激光共聚焦測鈣系統，包括共聚焦激發掃描顯微鏡以及流式細胞儀等。

2）具有更強的染料吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測Ca2+變化，從而降低對活細胞的光毒性。

3）Ca2+依賴性熒光強度增強，對Ca2+變化水平檢測敏感度更高。

4）降低樣品自熒光以及光散射的干擾。

5）兼容光激活探針以及UV-激發試劑，因此更方便于多參數檢測。

6）無光譜偏移。

Fluo-4, AM相比較于Fluo-3的優勢：

1）  激發和發射波長往短波長偏移10nm，更接近氬激光器的波長，。因此，當使用488nm進行熒光激發，得到更強的熒光信號，比Fluo-3強一倍。

2）  50μg小包裝供應，使用方便，且能很好保證產品的穩定性。

Fluo-4, AM的應用圖片：

Fig. 1, U2OS cells were seeded overnight at 40,000 cells per 100 μL per well in a 96-well black wall/clear bottom costar plate. The growth medium was removed, and the cells were incubated with 100 μl of 4 μMFluo-3, AMorFluo-4, AMin HHBS at 37 °C, 5% CO2incubator for 1 hour. The cells were washed twice with 200 μl HHBS, then imaged with a fluorescence microscope using FITC channel.

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