Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori's Method)

堿性磷酸酶染色液（改良鈣鈷法）

產品信息

【溫馨提示】：見我司懋康生物整理的堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP）產品專題。

【溫馨提示】：見我司懋康生物整理的堿性磷酸酶活性檢測試劑盒（定量檢測）產品專題。

【溫馨提示】：見我司懋康生物整理的堿性磷酸酶染色檢測試劑盒（定性，干細胞檢測）產品專題。

產品描述

堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP或AP）是一類磷酸酯酶，堿性條件下能夠將核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化，廣泛分布于哺乳動物組織內。ALP主要存在于物質交換活躍處（細胞膜），如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮。還發現于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜及吞飲小泡。

本堿性磷酸酶染色液（改良鈣鈷法）（Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori's Method)）利用的是金屬沉淀法來定性檢測磷酸酶活性。檢測原理是以天然存在的β-甘油磷酸鈉為底物，經堿性磷酸酶水解釋放出磷酸，磷酸根與鈣離子結合為磷酸鈣沉淀，再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷，最終產物為黑色硫化鈷沉淀。

產品組成

保存與運輸方法

保存：2-8℃保存，6個月穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）   ALP染色液、ALP硫化液容易失效，建議開封后根據小份保存，避免重復性開蓋使用，影響性能。

2）   ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味，操作需小心。

3）   樣本需新鮮，取材后請立即處理，否則會影響酶活性。

4）   組織固定需在4℃進行，時間不要超過24h，否則酶活性會減弱或消失。

5）   組織在石蠟包埋時，溫度不要超過56℃。應使用熔點為52-54℃的石蠟進行浸染，浸蠟時間要短，否則酶活性會減弱或消失。

6）   石蠟切片脫蠟所用的二甲苯需用AR級以上的，不純的二甲苯會分解黑色沉淀。

7）   冰凍切片染色時，應減少切片在室溫暴露的時間。

8）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟

實驗前準備材料：蒸餾水，溫箱或水浴鍋

一、 石蠟切片染色

1.1    石蠟切片脫蠟至蒸餾水；

1.2   切片入ALP染色液，37℃孵育2~12h；

【注意：若需要做陰性對照，可選一切片入ALP對照液，該對照液不含酶的反應底物?！?

1.3    流動水清洗2min，入蒸餾水；

1.4    入硝酸鈷染液，37℃孵育5min；

1.5    流水洗5min，入蒸餾水；

1.6    準備ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸餾水或去離子水稀釋50倍，混勻即得到硫化工作液，現配現用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

1.7    流水洗10min，入蒸餾水；

1.8    （可選）核固紅復染細胞核，用蒸餾水洗；

1.9    石蠟切片常規脫水、透明、中性樹膠封片。

二、 冰凍切片染色

2.1 冰凍切片在丙酮-氯仿等量混合液內，4℃固定2-5min；

2.2  切片入ALP染色液，37℃孵育5-15min；

【注意：若需要做陰性對照，可選一切片入ALP對照液，該對照液不含酶的反應底物?！?

2.3 流水洗2min，入蒸餾水；

2.4 入硝酸鈷染液，37℃孵育5min；

2.5 流水洗5min，入蒸餾水；

2.6 準備ALP硫化工作液：取ALP硫化液用蒸餾水或去離子水稀釋50倍，混勻即得到硫化工作液，現配現用。切片放入硫化工作液，孵育1-2min；

2.7    流水洗10min，入蒸餾水；

2.8    （可選）核固紅復染細胞核，用蒸餾水洗；

2.9    冰凍切片用甘油明膠封片劑封片。

三、 染色結果

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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