Alkaline Phosphatase from E. Coli. 堿性磷酸酶，來自大腸桿菌

產品信息

【溫馨提示1】：見堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）產品專題，了解更多相關產品信息。

【溫馨提示2】：見堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）活性檢測試劑盒產品。

【溫馨提示3】：見堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）染色試劑盒產品。

產品描述

堿性磷酸酶（Phosphatase, Alkaline，ALP，EC 3.1.3.1），是一種含兩個相同亞基的二聚體，也是一種約含12%碳水化合物（6%己糖和6%其他中性糖）的糖蛋白，每個ALP分子含4個鋅離子和4個二硫鍵。鎂離子存在情況下，ALP可達到最高酶活。AP能催化磷酸單酯水解，比如對硝基苯酚磷酸鹽（pNPP）、磷酸苯酯、酚酞磷酸、α-甘油磷酸、β-甘油磷酸、2- 磷酸甘油酸、磷酸丙糖、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-1-磷酸、果糖-6-磷酸、腺苷-5-磷酸、腺苷-3-磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸和β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。

堿性磷酸酶（ALP）常用來偶聯抗體和其他蛋白，從而滿足ELISA、WB和組織化學檢測上的應用。通常用來蛋白的去磷酸化實驗，比如酪蛋白和核酸等。當需要高檢測靈敏度時也能用來蛋白標記。還可用在DNA或RNA 的5′-末端去磷酸以防止自連。經堿性磷酸酶的去磷酸化作用后，DNA 或 RNA 還可被放射性標記磷酸鹽標記（通過 T4 多核苷酸激酶）。

本品為大腸桿菌重組表達純化所得，以硫酸銨懸液形式提供，比活力≥10U/mg protein。

產品特性

1）CAS NO：9001-78-9

2）英文同義名：Phosphatase, Alkaline; Orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum); Phosphomonoesterase; Alkaline Phosphomonoesterase;

3）中文同義名：磷酸酶（堿性）；堿性磷酸單酯酶；大腸桿菌來源堿性磷酸酶；堿性磷酸酶（大腸桿菌）

4）來源：大腸桿菌（E. Coli）

5）純化方式：鹽分餾（Partially purified salt fraction）

6）外觀：2.5M硫酸銨懸液，pH 8.0

7）抑制劑：螯合劑和無機磷酸鹽

8）最佳pH：8.0

8）比活力：≥10 units/mg protein (25℃, pH 8.0)

9）活性單位定義：在25℃，pH8.0反應條件，每min內水解對硝基苯磷酸鹽(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)生成1 μmol對硝基苯酚(p-nitrophenol)所需的酶量定義為1個活性單位(unit)。 

保存與運輸方法

保存：2-8℃保存，1年穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）本品穩定性高，反應需Zn²⁺，Mg²⁺可提高酶活。在螯合劑存在條件下，100℃加熱可導致酶暫時性失活，但恢復至室溫酶活會恢復，必須進行苯酚處理，才能引起酶完全失活。本品最適pH約8.0，Tris等醇類化合物可提高酶活。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

附錄1 純化酶產品（硫酸銨懸浮液形式）使用指導

1）當硫酸銨可能會干擾酶反應，操作如下：

1.1 從冰箱內取出酶?！咀ⅲ毫蛩徜@懸浮液產品不可凍存??！】

1.2 確保蓋子擰緊，然后顛倒混勻數次得到乳白色懸浮液，此過程可能需要一分鐘左右。不可渦旋或超聲，因如此強烈的處理可能會引起某些酶的變性。

1.3 使用寬口槍頭，吸取一部分懸浮液轉移到一干凈的離心管內。

1.4 約10,000~15,000x g離心10min。若是條件允許，低溫（2-8℃）設置下離心。

1.5 小心吸取盡可能透明的上清液，并保留到一干凈的離心管內。沒有必要完全吸掉所有的硫酸銨溶液。

1.6 用適量的反應緩沖液加入沉淀中并使其溶解。

1.7 對上述得到的上清液，以及用反應緩沖液溶解的酶溶液進行蛋白含量和/或酶活力檢測。

【注：具體酶的活力檢測方法可見我司官網或與我們聯系索取相關資料?！?/span>

2）當硫酸銨不會干擾酶反應，操作如下：

2.1 從冰箱內取出酶?！咀ⅲ毫蛩徜@懸浮液產品不可凍存??！】

2.2 確保蓋子擰緊，然后顛倒混勻數次得到乳白色懸浮液，此過程可能需要一分鐘左右。不可渦旋或超聲，因如此強烈的處理可能會引起某些酶的變性。

2.3 使用寬口槍頭，吸取一部分懸浮液直接加入反應緩沖液中即可。

【注意：對于硫酸銨懸浮液，絕大部分的酶都是以固體形式存在。很有可能僅僅可忽略量的酶以溶于硫酸銨溶液的形式存在?！?/span>

附錄2 堿性磷酸酶（大腸桿菌來源）活力測定方法，點擊此處下載PDF文檔。