Trypsin 1:250, Powder (Porcine) 豬源胰蛋白酶1:250（粉末）

產品標簽

Trypsin 1:250 胰酶；Collagenase NB 4 膠原酶NB4（標準級別）；Trypsin-EDTA (0.25%)；Dispase II中性蛋白酶；Roche；CAS：9001-12-1；

產品信息

產品描述

胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），CAS：9002-07-7，來源于胰腺的一種絲氨酸蛋白酶，由223個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，底物特異性是帶正電荷的賴氨酸和精氨酸側鏈。胰酶主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端，當兩者之一緊隨為脯氨酸的情況除外。另外，當切割位點任一邊緊鄰酸性殘基，胰酶水解速率也會減緩。

胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），以無活性的胰蛋白酶原（Trypsinogen）形式分泌于胰腺中，通過切割其末端六肽而得到活化，產生天然單鏈形式的β-胰酶（β-Trypsin），隨后進行有限的自發裂解產生具水解活性的α-Trypsin（由二硫鍵共價連接的二條肽鏈組成）。胰酶水解活性可被多種化合物所抑制，有1）來源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制劑；2）銀離子；3）有機磷化合物，如氟磷酸異丙酯DFP；4）特定蛋白酶抑制劑，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等；

本品是來源于豬胰腺的胰蛋白酶凍干粉，經γ射線處理滅活病毒，經過豬細小病毒和支原體檢測。基于標準測定方法的酶活力為250 units/mg，即1:250。廣泛用于細胞傳代，對貼壁細胞進行消化以制備單細胞懸液，常用的工作濃度是0.025-0.5%（w/v）。也可聯合其他蛋白酶如膠原酶、彈性蛋白酶一起使用，以消化組織。

產品特性

1）  EC NO：3.4.21.4

2）  CAS NO：9002-07-7

3）  同義名：Trypsin, from Porcine Pancreas; Trypsin Powder, Porcine 1:250; Tryptase; Tryptar; Cocoonase; Parenzyme; Parenzymol;

4）  分子量：23.4 kDa

5）  螯合劑：無EDTA

6）  酚紅指示劑：無酚紅

7）  外觀：白色至類白色粉末

8）  溶解性：溶于水，幾乎不溶于乙醇和甘油

9）  最佳工作溫度：37°C

10）最佳工作pH：7.0-9.0

11）酶活性：根據美國藥典專論規定的胰蛋白酶活性測定條件（25°C 10 min，pH 7.6），1 g胰蛋白酶能消化250 g酪蛋白底物。

保存與運輸方法

保存：2-8℃干燥保存，3年有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

1. 胰酶儲存液（2.5%，w/v）的配制

1.1 稱取2.5g胰酶粉末溶于100ml不含鈣鎂的平衡鹽緩沖液，如HBSS（Hank′s Balanced Salt Solution），并調整pH在7.4-7.6，此時得到的即2.5%胰酶儲存液，置于4℃短時間保存，3個月相對穩定。建議分裝凍存，利于長期保存。解凍后可能會出現少量沉淀，屬于正?，F象，不會影響使用效力。

1.2 細胞的消化可以直接用胰酶溶液，但常使用胰酶-EDTA溶液，因為EDTA是一種II價金屬離子螯合劑，能夠螯合鈣鎂離子，減少細胞間的粘附性，從而增強胰酶活性。

【注①】：胰酶用于細胞傳代的工作濃度范圍為0.025%-0.5%，具體濃度的選擇主要受胰酶活性、孵育時間和細胞系類型幾個方面影響。若用過高濃度消化過長時間，會破壞細胞膜結構，進而殺死細胞。當對使用濃度把握不大，建議先使用低濃度消化，慢慢的摸索出合適的工作濃度。

【注②】：胰酶-EDTA溶液的配制（僅作參考，根據需要的實際胰酶濃度來調整）

1. 
   

2. 2. 貼壁細胞消化（培養板）

3. 2.1 吸掉培養板內培養液，用不含Ca2+/Mg2+的緩沖液清洗單層貼壁細胞，直至清除殘余血清，吸掉鹽溶液。

4. 2.2 向上述貼壁細胞中加入適量胰酶溶液或者胰酶-EDTA溶液，完全覆蓋細胞即可。此時將細胞置于37℃培養箱孵育2min左右

5. 2.3 立即取出，傾斜培養板，吸掉胰酶或者胰酶-EDTA溶液，輕拍培養板，觀察細胞的消化狀態。若消化不夠，可放回37℃培養箱短時孵育，直至細胞從表面脫落。整個消化過程可通過倒置顯微鏡來觀察。

6. 【注①】：消化時間跟細胞類型、細胞密度、培養液內血清濃度、胰酶活性、以及消化前細胞培養時間等因素有關。胰酶對細胞的損傷以及消化時間盡量保持在最低水平】。

7. 2.4 加入含血清的適量培養液到消化好的細胞內，輕輕反復吹吸從而將細胞從培養板底盡可能吹離，以及吹散細胞團，吹洗時盡量避免氣泡的產生。

8. 【注①】：血清能抑制進一步的胰酶消化，保護細胞不被過度消化。當使用無血清培養液，建議此時加入等摩爾的大豆胰酶抑制劑（Soybean trypsin inhibitor）以起到相同效果。

9. 2.5 進行下一步操作【亞培養，或細胞計數】或細胞凍存。

10. 【注①】：操作時務必小心謹慎，同時時刻注意避免交叉污染發生的可能性。

11. 
    

注意事項

1）胰蛋白凍干粉產品常遇到的活性定義及其轉換，

1 BAEE Unit：在25℃，pH 7.6的條件下，以BAEE為底物，3.2 ml的反應體系中，A253吸光值每分鐘會發生0.001的變化即為一個酶活單位。

1 TAME Unit：在25℃，pH 8.2，0.001M Ca2+條件下，每分鐘水解1μmol p-toluenesulfonyl-L-arginine methyl ester（TAME）的用量。

1 USP Unit：在指定條件下，每分鐘引起吸光值發生0.003的變化的樣品活性。

1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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