★  服務簡介

Cas9蛋白的CDS長達4kb，克隆難度和包毒難度都相對大，將Cas9基因高效導入細胞是應用Cas9/CRISPR系統進行基因敲除的難點之一，極大地限制可供選擇的將基因導入細胞的方法。并且在用CRISPR/Cas9系統進行基因敲除時，還需要同時轉入識別靶點的gRNA，篩選陽性細胞的抗性基因或熒光基因，用同源重組法進行基因敲除，還需要導入同源重組模板。如此多的基因共同表達，很難得到較高的基因編輯效率，造成后續的陽性克隆篩選和檢測工作難度大。

懋康生物獨創性研發出慢病毒Cas9表達體系。該體系采用慢病毒體系先在細胞中穩定表達Cas9蛋白，構建穩定表達Cas9蛋白的細胞系，再在該細胞系的基礎上導入gRNA和基因敲除實驗中用到的其它原件。該體系采用慢病毒體系先在細胞中穩定表達Cas9蛋白，構建穩定表達Cas9蛋白的細胞系，再在該細胞系的基礎上導入gRNA和基因敲除實驗中用到的其它原件用于特異性基因敲除。

CRISPR/Cas9是一種最新的靶向基因敲除技術，能夠強有力的作用于基因組的分子生物學工具。該技術現已證明能夠在多種哺乳動物細胞，植物細胞，酵母中進行靶向基因敲除和定點編輯。傳統的CRISPR/Cas9系統需要分別轉錄出tracrRNA（trans-activating RNA）和crRNA (CRISPR RNA)，然后這兩者通過堿基配對形成tracrRNA:crRNA二元復合體指導Cas9蛋白剪切特定位點的雙鏈DNA（圖1）。我公司采用新型的單鏈引導RNA(single guide RNA,sgRNA)可以模擬tracrRNA:crRNA二元復合體,能夠直接與Cas9核酸酶構建在同一質粒上，表達后指導基因組DNA的切割（圖2）。

                                            圖1：傳統的CRISPR/Cas9系統                                圖2：單質粒CRISPR/Cas9系統

1：適用于在同一個細胞系中需要進行多個基因敲除的實驗；

2：基因敲除效率比直接質粒轉染更高；

3：提供多種不同熒光和抗性標記的慢病毒表達載體，更易篩選到基因敲除成功細胞；

4：接受cas9蛋白穩定表達不同細胞系定制。