熒光定量PCR技術(Fluorescence Quantitative Real Time PCR,RT-PCR)是在常規PCR技術的基礎上引入了一種熒光化學物質。該熒光物質能夠隨著PCR反應產物的不斷累加,產生成比例的熒光信號強度。這樣就可以通過監測熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監測。目前,實時熒光定量PCR技術已經廣泛的應用于生物基礎科學研究、醫學臨床診斷、疾病研究及藥物研發等領域。本公司可根據您的科研需求,為您提供SYBR Green染料法或TaqMan探針法實時熒光定量PCR檢測服務。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監測, 實現對基因的相對定量、絕對定量和定性分析。
熒光定量PCR可以利用內參基因對實驗基因的表達進行相對定量分析,也可以通過外用標準品對實驗基因進行絕對定量分析。
2:miRNA 的定量與定性分析:
MicroRNA(miRNA)成熟體是由21—23個堿基構成的含有發夾結構的單鏈小分子RNA,長度太短不能通過普通的實時定量PCR進行檢測。因此,我們通過加尾法(在miRNA的3’段加一個polyA尾巴)及頸環法(設計特殊的含有莖環結構的反轉錄引物,配合實時定量PCR引物及探針)可以精確檢測微量樣品中microRNA表達水平。
3:lncRNA的定量與定性分析:
長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)與mRNA相比是不編碼蛋白的,但又比miRNA要長(大于200nt),研究證明ncRNA 能在表觀遺傳、轉錄及轉錄后水平上調控基因表達,與人類疾病的發生、發展和防治有著密切的聯系。我公司可設計特異性引物對lncRNA進行定量分析。
4:定性分析
熒光定量PCR還可以用來檢測單核苷酸多態性(SNP)、點突變、等位基因以及DNA甲基化等。能夠簡單快速地對目的基因進行高特異性、高靈敏度的檢測,同時閉管操作的實時檢測可以有效防止反應產物的污染。
主要過程為:RNA抽提與定量;引物設計及熒光定量PCR;數據分析;實驗報告提交。(畫圖說明)
★ 服務說明
1:在服務開始前,請先咨詢我們公司。我們會針對您的實驗目的設計個性化的最優實驗方案。
2:客戶提供的實驗材料必須在正確的條件下保存和運輸(上海本地客戶我們可以上門提?。?。我們不推薦直接提供RNA或cDNA樣品,除非能證明提供的樣品質量可以用于熒光定量PCR。
3:客戶需提供盡可能詳細的實驗背景信息(包括物種信息,目的基因信息等)。
4:客戶可以自己提供熒光定量PCR引物,也可以由我們設計并合成,但需收取相應費用。
5:為了確保實驗數據的可靠性,每個樣品我們都采用三復孔,且保證熔解曲線的單一性。
★ 服務周期
實驗周期視具體的樣品數量及需測定的數據數目而定。