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RNAi穩轉株構建服務
時間：2016-05-11     作者：懋康生物    
★ 服務描述
shRNA穩轉株是指能持續穩定表達干擾特定基因shRNA的細胞。RNA干擾是基因功能研究中最常用的手段之一。懋康生物利用慢病毒將shRNA序列整合入細胞基因組，并通過慢病毒載體攜帶的抗性基因（通常為新霉素，嘌呤霉素，潮霉素）篩選出穩定轉染shRNA的細胞，使其成為shRNA穩定轉染細胞系。
★ 服務內容
1：shRNA干擾靶點序列的設計；
2：shRNA 慢病毒質粒的構建；
3：shRNA慢病毒包裝與病毒滴度測定；
4：:病毒感染靶細胞并從RNA水平（Real-time PCR）和/或蛋白水平（Western Blot）驗證干擾效果； 
5：選出干擾效果最好的細胞，利用慢病毒載體攜帶的抗性基因篩選建立穩定細胞系；
★ 服務說明
1：我們的RNA干擾服務針對所有的哺乳動物細胞，暫不提供植物和原核生物的RNA干擾服務；
 2：RNA干擾的對象可以是編碼蛋白的mRNA序列，也可以是長的非編碼RNA(lncRNA)序列；
3：針對不同的靶基因，我們一般設計3-4條干擾序列，保證至少有一條序列干擾效果大于70%（RNA水平）；
4：我們提供多個慢病毒干擾載體供客戶選擇（見下方載體信息）；
5：對于干擾效果的驗證，客戶可以選擇只從RNA水平（或蛋白水平）進行驗證，也可選擇兩個水平都進行驗證（lncRNA無法從蛋白水平驗證）；
6：靶細胞和Western Blot 實驗需要的一抗由客戶提供，也可委托我公司代購；
7：Real-time PCR采用SYBR Green 法 三復孔進行干擾效果驗證，確保實驗結果真實可信；
★ 客戶所得
1：構建好的慢病毒干擾質粒，剩余病毒及穩轉株細胞；
2：完整的實驗報告（包括實驗材料，實驗步驟，實驗結果等）及慢病毒使用操作說明書一份；
★ 服務周期
從靶點設計到穩轉株完成總共需要45個工作日；
★ 載體信息

載體編號

篩選標記

載體骨架主要元件

熒光

真核抗性

pHY-LV-KD1.1

GFP

無

U6-shRNA-CMV-GFP

pHY-LV-KD1.2

RFP

無

U6-shRNA-CMV-RFP

pHY-LV-KD1.4

無

Puromycin

U6-shRNA-CMV-Puromycin

pHY-LV-KD2.1

GFP

無

U6-shRNA-EF1α-GFP

pHY-LV-KD3.1

GFP

無

U6-shRNA-UBC-GFP

pHY-LV-KD5.1

GFP

Puromycin

U6-shRNA-CMV-GFP-PGK- Puromycin

pHY-LV-KD5.2

RFP

Puromycin

U6-shRNA-CMV-RFP-PGK- Puromycin

pHY-LV-KD5.4

GFP

Puromycin

U6-shRNA-UBC-GFP-PGK- Puromycin

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