Detection and measurement of hydrogen peroxide:

過氧化氫（Hydrogen peroxide, H₂O₂）特異性熒光探針專題

專題關鍵詞：

ROSGreen^TM H2O2 Probe；BES-H2O2-Ac；hydrogen peroxide (H2O2) 過氧化氫；HYDROP-EX；Amplex Red reagent；Peroxidase 過氧化物酶；

專題背景：

活性氧（ROS）比如超氧陰離子（O2-.），過氧化氫（H2O2）和羥基自由基（HO .）是各種疾病病理發展中的重要調節劑。DCFH和DCFH-DA普遍用作熒光探針測定細胞來源的過氧化氫（H2O2），但這些化合物最大的缺陷在于對H2O2的選擇性極其弱。

為此，很多公司開發特異性的過氧化氫（H2O2）探針，以闡明H2O2導致疾病相關的細胞反應和動力學功能。

一、高選擇性過氧化氫探針（BES-H2O2-Ac，BES-H2O2，from wako chemical）

Wako chemical公司開發兩款BES-H2O2，分別檢測細胞來源的H2O2和細胞非滲透性的H2O2，具高選擇性。

1）兩款探針作用機理如下：

2）兩款探針的應用示例：

圖：BES-H2O2檢測Jurkat T細胞的熒光成像和同一視野下的相位對比成像圖。Jurkat T細胞用含50μM BES-H2O2-Ac的培養基孵育1h。之后，其中一組細胞用含5mM 丁酸（H2O2產生的刺激物）的培養基處理，而另一組用正常培養基（不含H2O2產生的刺激物）處理，分別培養1h。（圖片來源: Professor Hatsuo Maeda, PhD., School of Pharmacy, Hyogo Univ. of Health Sciences）。

3）兩款探針的訂購信息：歡迎來電咨詢021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

產品優勢：

□     高度選擇性結合H2O2;

□     BES H2O2-Ac具細胞膜滲透性；

□     檢測細胞來源的H2O2；

□     適用于熒光成像；

二、高選擇性過氧化氫探針（ROSGreenTMH2O2 Probe過氧化氫熒光探針，from MKBio）

懋康生物（MKBio）開發一款細胞膜滲透性的過氧化氫特異性探針：ROSGreenTMH2O2 Probe。

1）  探針描述

過氧化氫（Hydrogen peroxide, H2O2）是一種反映氧代謝副產物，用于許多氧化應激相關態的關鍵調節劑，參與人體大量的生理和病理活動，比如哮喘、動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、神經性衰退疾病和唐氏綜合征等，但目前對H2O2生成、積累、運輸和功能的分子機制仍了解很少，最大的限制在于缺乏靈敏且特異性H2O2探針，用于活細胞研究。目前能得到的H2O2反應性探針的缺陷包括1）來自其他ROS比如過氧亞硝基陰離子（ONOO-）、過氧化基（ROO?）、超氧化物（?O2–）的背景熒光干擾；2）對外源活化酶的需求；水缺乏水溶性或不兼容于水溶體系；4）以及紫外區域的激發光譜特征等。

本ROSGreenTMH2O2Probe正是克服以上缺陷開發的一款過氧化氫（H2O2）選擇性探針。探針本身無熒光，可見光區域內無吸收峰。一旦接觸H2O2，瞬間激發熒光增加并伴隨可見波長吸收帶的生成（Ex/Em= 490/514nm）。因其二元的吸收/發射熒光反應，此探針具有較大的動力學范圍。與相似的ROS比如O2–，NO，或OCl-相比，ROSGreenTMH2O2Probe對H2O2呈現出＞100倍（100-fold）的選擇性。

2）  應用示例

圖. Costar 黑色96孔培養板內CHO-K1活細胞用ROSGreenTMH2O2Probe的染色圖。圖A：對照細胞；圖B：用H2O2（100μM）處理5min后的細胞；

3）訂購信息：歡迎來電咨詢021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

產品優勢：

□     高度選擇性結合H2O2;

□     ROSGreenTMH2O2 Probe具細胞膜滲透性；

□     檢測溶液或細胞來源的H2O2；

□     適用于熒光成像和流式細胞分析；

三、選擇性過氧化氫探針（ADHP，Amplex®Red過氧化氫探針，from MKBio）

懋康生物（MKBio）供應的10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙?；?3,7-二羥基吩嗪，以商標名Amplex®Red在市場上銷售，是目前為止最靈敏和穩定的熒光探針用來檢測HRP和H2O2。

1）  基本描述

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙?；?3,7-二羥基吩嗪，以商標名Amplex®Red在市場上銷售。ADHP是一種高度靈敏和穩定的過氧化物酶底物，選擇性檢測過氧化氫（H2O2）。存在辣根過氧化物酶（HRP）的體系中，這一基本無色和非熒光的ADHP與H2O2以1：1的化學定量比反應，生成強紅色熒光的試鹵靈（Resorufin），可通過熒光光度計和酶標儀分析結果。許多酶反應能產生H2O2，因此，ADHP能夠用在偶聯酶促反應中檢測許多不同酶的生物活性。

2）  工作原理

圖. 使用ADHP進行偶聯酶促反應的工作原理。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成過氧化氫（H2O2），通過辣根過氧化物酶（HRP）催化ADHP反應生成強熒光試鹵靈（Resorufin）。

3）  常見應用

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前為止最靈敏和穩定的熒光探針用來檢測HRP和H2O2。

A）  ADHP普遍用來檢測許多免疫實驗中的HRP；

B）  ADHP用來檢測微量的H2O2；

Zhou, M.等研究表明ADHP（Amplex®Red）檢測過氧化物酶活性，最少能檢測1×10?5U/mL HRP；或H2O2，最少能檢測50nM H2O2?！疚墨I來源：Zhou M et al. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases. Anal Biochem. 1997 Nov 15;253(2):162-8.】

4）  訂購信息：歡迎來電咨詢021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

四、過氧化氫清除劑（Hydrogen Peroxide Scavenger from MKBio）

五、過氧化氫活性檢測試劑盒（Hydrogen Peroxide assay kit）

懋康生物作為AAT bioquest在中國的授權代理商，提供該品牌的優質過氧化氫活性檢測試劑盒，比色法（Cat#: 11500）和熒光法（Cat#:11501），請根據實驗具體需求以及現有檢測儀器來選擇合適產品。

1）試劑盒特征（比色法，Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

測定對象：溶液和細胞裂解液

檢測原理：使用Amplite? IR過氧化物酶底物來定量檢測溶液和細胞提取物內的過氧化氫水平。一旦過氧化氫氧化，無色的Amplite? IR產生強藍色產物，在pH 4-10范圍內不受pH影響。

測定儀器：吸光度測定酶標儀（650nm）

結果展示：

2） 試劑盒特征（熒光法，Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

測定對象：溶液和細胞裂解液

檢測原理：使用Amplite? red過氧化物酶底物來定量檢測溶液和細胞提取物內的過氧化氫水平。

測定儀器：熒光酶標儀（540nm/590nm）

結果示例：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。