活性氧（reactive oxygen species, ROS）熒光探針系列之：

CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化應激檢測試劑

背景需求：

氧化應激是由于反應性活性氧物質ROS產生和細胞清除ROS的不平衡導致的，ROS與核酸、蛋白質和脂質反應導致細胞和組織損傷。ROS的過多累積往往引起某些疾病的發生，包括炎癥、動脈粥樣硬化、衰老以及衰老相關的退行性疾病等。為此，ROS產生及其治病機理的研究越來越受到科學家的關注。

基本介紹：

CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）是專門設計用來可靠檢測活細胞內活性氧ROS的一系列熒光探針。這些細胞膜滲透性的試劑當處于還原態時無熒光或極弱熒光，一旦被氧化后發出強熒光。

Thermo Fisher (Invitrogen)提供三種CellROX氧化應激試劑，CellROX Green Reagent是一種DNA染料，一旦氧化后與DNA結合，因此，信號主要定位在細胞核和線粒體。相反，CellROX Orange Reagent和CellROX Deep Red Reagent的熒光信號定位在細胞質。CellROX氧化應激試劑產生的熒光皆可用傳統的熒光顯微鏡、高內涵篩選儀器（HCS）、流式細胞儀、熒光酶標儀或高通量篩選（HTS）。還與各種臺式儀器兼容，比如FLoid?，Tali?，和Attune?儀器。

產品優勢：

CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）具有以下優勢：

◇ 染色流程非常簡單（見Fig 1. CellROX Green Reagent的染色流程圖），試劑直接加入完全培養基或緩沖液內的細胞。

◇ 與傳統的ROS檢測探針相比，光穩定性非常好。另外，某些CellROX氧化應激試劑經后期的甲醛固定和去污劑透化處理后，仍維持良好的熒光信號（見Table 1. ROS檢測方法的比較表）。

◇ 通過對內皮細胞維生素K3誘導的ROS生成的抑制實驗，發現CellROX氧化應激試劑特異性檢測ROS（見Fig 2 基于CellROX氧化應激試劑定量和統計分析氧化應激水平）。

A）CellROX Green Reagent. 在MatTek激光共聚焦專用玻底培養皿內接種培養牛肺動脈內皮細胞（BPAE）。之后用含維生素K3（100μM）或不含維生素K3的培養基37℃處理1h。向某些對照和維生素K3處理孔內加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50μM）。之后細胞用CellROX Green Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置顯微鏡下檢測（40X物鏡）。N-乙酰半胱氨酸處理抑制TBHP誘導生成的ROS，證實CellROX檢測到的熒光信號來自化合物誘導產生的ROS。

B）CellROX Orange Reagent. 在96孔板內接種培養牛肺動脈內皮細胞（BPAE）。之后用含TBHP（200μM）或不含TBHP的培養基37℃處理2h。向某些對照和TBHP處理孔內加入依布硒（依布硒啉）（Ebselen，10μM）。之后細胞用CellROX Orange Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。依布硒啉抑制TBHP誘導產生的ROS，證明CellROX檢測到的熒光信號來自化合物誘導產生的ROS。

C）CellROX Deep Red Reagent. 在96孔板內接種培養牛肺動脈內皮細胞（BPAE）。之后用含維生素K3（100μM）或不含維生素K3的培養基37℃處理1h。在孵育的后30min向某些對照和維生素K3處理孔內加入超氧化物清除劑MnTBAP（100μM）。之后細胞用CellROX Deep Red Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。

◇ CellROX氧化應激試劑能偶與其他細胞活力檢測探針聯合檢測，是一種非常有用的多重熒光方法來測定大量的細胞現象（見Fig 3 人U2-OS細胞的氧化應激檢測）。

Fig 3. 表達Celllight Actin-RFP的人骨肉瘤細胞（U2-OS）用維生素K3(Menadione, 100μM)處理1h。之后用CellROX Green Reagent（5μM）和Nucblue live cell stain（2滴/ml）于37℃染色30min。細胞清洗后置于活細胞成像液內檢測。

CellROX訂購信息：以上所有產品均為Life（Invitrogen）原裝正品，原始包裝為10x50 μg（10支50μg單個包裝構成）。我司對C10444、C10422進行拆開銷售，特惠價為2180元/支，單支50μl，現貨銷售，歡迎訂購。

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