【溫馨提示】：
見我司懋康生物整理的酵母雙雜交檢測（Yeast two-hybrid assay）產品專題。
基本描述
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?（酵母轉化試劑盒）是一款專門設計用于酵母轉化和文庫篩選的試劑盒，比目前商業或公開的文獻方法更快捷和更有效。本試劑盒制備的酵母細胞可立即用于轉化或凍存待用（≤ -70°C）。本試劑盒制備的細胞適用于環形和線性DNAs轉化，同時也能用于其他真菌包括C. albicans，S. pombe和P. pastoris的轉化。
產品亮點：
~ 高轉化效率：每μg質粒DNA（環形）可產生105- 106個酵母轉化子；
~ 制備好的感受態細胞可凍存后待用；
~ 快速簡單步驟于10min內可制備酵母感受態細胞；
~ 簡單單一步驟，1h內完成轉化；
~ 適用菌株類型廣（S. cerevisiae, C. albicans, S. pombe, Pichia pastoris）；
~ 簡單方法用于多質粒轉化；
產品組分：本試劑盒可做120個常規轉化或600個微量轉化實驗。試劑盒4℃一年有效。
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組分 |
規格 |
保存 |
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EZ1 Solution |
60ml |
0-4℃ |
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EZ2 Solution |
6ml |
0-4℃ |
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EZ3 Solution |
60ml |
0-4℃ |
操作流程【見下圖】：
A. 感受態細胞制備
30℃，于10ml YPD肉湯培養酵母菌直至中數量級（~5 x 106-2 x107cells/ml或OD600= 0.8-1.0）。以下步驟室溫進行。
A1，500 x g離心細胞4min，吸掉上清液；
A2，加入10ml EZ1溶液清洗沉淀。重新離心沉淀細胞，吸掉上清液；
A3，加入1ml EZ2溶液重懸沉淀細胞。
此時獲得的感受態細胞即可直接用于轉化或凍存備用（≤ -70°C）。注意需緩慢凍存細胞，不可使用液氮瞬間凍存細胞。
B. 轉化
以下步驟適用于新鮮制備和凍存（室溫融化）的酵母感受態細胞。
B1，取50μl感受態細胞與0.2-1μg DNA（體積少于5μl）混合；加入500μl EZ3溶液，完全混合；
B2，30°C孵育45min，孵育過程中用手指輕彈或低速渦旋（如果適用于轉化DNA）2-3次讓其混勻；
B3，從上面轉化混合液中取50-150μl到適當平板上，沒有必要沉淀或清洗細胞。、
B4，30°C孵育平板2-4天使得轉化子生長。
訂購信息：Zymo Research原裝正品，現貨供應。歡迎來電咨詢，021-54736159，QQ：2971634497。
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
價格（元） |
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T2001 |
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?（酵母轉化試劑盒） |
120 Rxns |
1532 |
T2001 Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? User Manual
常見問題（FAQs）：
1. 試劑盒內含什么及工作原理？
答復：試劑盒所用步驟是特別設計，某些步驟，類似于基于鋰陽離子的方法，不需要原生質體制備。作用機制可能涉及一些代謝通路，但并未完全清晰。
2. 試劑盒是否適用于C. albicans，S. pombe，或Pichia pastoris？
答復：根據Zymo實驗室內部數據，適合以上菌株感受態細胞制備和轉化。
3. 感受態細胞≤ -70°C能存放多久？感受態細胞的融化方法？
答復：感受態細胞≤ -70°C保存半年轉化效率不會有損失，超過半年效率開始逐漸降低。
4. 感受態細胞的反復凍融會影響轉化效率？
答復：室溫融化。
5. 限制性內切酶處理的質粒是否不經純化就能直接轉化？
答復：是的。不同的內切酶消化緩沖液對轉化效率影響微弱。每個轉化實驗將DNA體積調整到5μl。
6. 是否需要使用含山梨醇的平板？
答復：不需要。任何平板都適合本轉化實驗。
7. 是否添加載體DNA？
答復：不需要添加載體DNA。
引用文獻（Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit?）：
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Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit? in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species. |
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The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength. |
— — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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