關鍵詞:淋巴細胞活化(Lymphocyte Activation),胞內細胞因子表達,流式分析FACS,PKC激活劑PMA,鈣離子載體,蛋白轉運阻斷劑,CAS:20350-15-6
基本描述:
細胞因子(Cytokines)表達水平高低直接反映細胞在特異性刺激劑(物)下的應答活動,免疫學研究通常使用適當的刺激劑來激活細胞應答,并通過某些藥物如莫能霉素(monensin)或布雷非德菌素A(Brefeldin A,BFA)作用以阻斷胞內高爾基體介導的蛋白轉運,促使細胞因子累積,提高細胞因子的胞內信號,從而能借助流式分選技術(FACS)檢測細胞因子的表達水平。細胞因子表達具有自身的特征性。
常見的蛋白轉運抑制劑:
1、 Monensin莫能霉素,CAS:22373-78-0
簡單描述:天然離子載體(ionophore),選擇性結合單價陽離子如Li+、Na+、K+、Rb+、Ag+和Tl+,并將這些陽離子轉運到細胞膜內??善茐母郀柣w,抑制細胞內的蛋白轉運,常用作蛋白轉運抑制劑,用于抑制細胞因子等分泌型蛋白的分泌,使其保留在細胞內。
2、 Brefeldin A(BFA,布雷非德菌素A),CAS:20350-15-6
簡單描述:一種常用的蛋白轉運抑制劑,特異性地可逆地阻斷蛋白質從內質網(ER)轉運到高爾基體(Golgi)。經BFA處理,高爾基體很快被破壞并融合到內質網上,該過程呈現能量、溫度和微管依賴性。BFA是一種真菌代謝物,最初曾用作抗病毒試劑,現主要用于研究蛋白轉運。BFA也常被用于抑制細胞因子等蛋白的分泌,并用于增強分泌蛋白的免疫染色檢測。BFA可激活神經鞘磷脂循環(sphingomyelin cycle),還可誘導一些腫瘤細胞發生凋亡。
一些應用實例:
細胞因子 |
克隆號 |
靶向細胞 |
刺激物 |
刺激時間 |
蛋白轉運抑制劑 |
表面標志蛋白 |
IL-2 |
JES6-5H4 |
Splenocytes |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD3 |
IL-3 |
MP2-8F8 |
Purified CD4+ T cells stimulated with immobilized anti-CD3 (10 μg/ml) + soluble anti-CD28 (2 μg/ml) + IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 + IL-4 for 3-4 days |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD4 |
GM-CSF |
MP1-22E9 |
Splenocytes stimulated with immobilized anti-CD3 (10 μg/ml) + soluble anti-CD28 (2 μg/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 3-4 day |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD3 |
IFN-γ |
XMG1.2 |
Splenocytes |
PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml) |
4-6 h |
monensin or brefeldin A |
CD3 |
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貨號 |
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MZ2101-1ML |
1ml |
165 |
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Monensin, Sodium Salt 莫能霉素(鈉鹽) |
100mg |
460 |
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200μl |
245 |
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MZ2103-1000UL |
Brefeldin A (BFA, 5mg/ml) 布雷非德菌素A |
1ml |
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5mg |
880 |
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25mg |
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