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Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒
目錄號 MP7508-20T 售價 680.00元
規格 20t 運輸溫度 冰袋運輸
其他名稱 保存溫度 室溫密封保存
CAS號 N/A 有效期 3個月有效
應用 抗酒石酸酸性磷酸酶染色(定性) 訂購數量
產品簡介:


Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit

抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒



產品信息

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)

Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒

MP7508-20T

20T

680

【重要提示】為了保證試劑盒的工作性能,本試劑盒開封后,于實驗前嚴格按照說明書配制各底物反應液和反應工作液,配制的溶液請立即使用,當天一次用完。初次使用本試劑盒,先做2~3張片做預實驗,之后盡快完成批量實驗。

 

產品描述

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP),是一類磷酸酯酶,在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個蛋白家族,哺乳動物中分子量從18kD到100kD不等。ACP主要分為兩類,一類為抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP),一類為抗氟酸性磷酸酶(Fluoride resistant acid phosphatase,FRAR)。


TRAP是一種糖基化的含金屬蛋白酶,在破骨細胞(Osteoclast)和破軟骨細胞(Chondroclast)中高表達,在活化的巨噬細胞和神經元中也有表達。存在于正常人肺泡巨噬細胞和白血病人脾臟的TRAP均在細胞濾泡中,并非釋放到血液中。血液中TRAP絕大部分來源于破骨細胞,因此,測量血液中TRAP可以了解破骨細胞的功能狀態。TRAP在細胞信號轉導、細胞增殖和分化等方面起重要作用,也和活性氧產生和鐵離子轉運等有關。


本抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit)以萘酚AS-BI為底物,酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚,萘酚與重氮鹽偶聯生成有色產物,定位于細胞質中。若細胞內ACP含抗酒石酸活性,則呈陽性反應。本品可用于新鮮血涂片/骨髓涂片、細胞爬片、冰凍切片和石蠟切片中的破骨細胞染色。本試劑盒可染20~30張片。


產品組成

組分編號

組分名稱

組分規格

MP7508-A

固定液

1瓶(40ml)

MP7508-B

底物液

底物反應液B1

甲液

j 甲粉:1支

k 甲粉溶解液:1支(500μl)

乙液

l 乙粉:1支

m 乙粉溶解液:1支(500μl)

底物反應液B2

j 丙粉:1支

k 丙粉溶解液:1支(500μl)

底物反應液B3

1支(1ml)

底物反應液B4

j 丁粉:1支

k 丁粉溶解液:1支(500μl)

MP7508-C

蘇木素染色液

1瓶(10ml)

MP7508-D

甲基綠染色液

1瓶(10ml)


保存與運輸方法

保存:室溫密封保存,3個月有效。務必知悉:所有應用液配制后即可使用,務必當天用完。

運輸:冰袋運輸。


注意事項

1) TRAP染色液易失效,請務必現配現用。

2) GBC染色液請不要置于-20℃凍存,需2-8℃避光保存。

3) 樣本需新鮮,取材后請立即處理,否則會影響酶活性。

4) 對于冰凍切片染色,應盡量減少切片在室溫暴露的時間。

5) 對于血液涂片,推薦皮膚穿刺血涂片,晾干后及時染色

6) 本品不建議用于石蠟切片染色。

7) 組織固定需在4℃冰箱進行,時間不要超過24h,否則酶活性會減弱或消失。

8) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


試劑準備

【務必知悉】:為了保證試劑盒的工作性能,本試劑盒開封后,于實驗前嚴格按照說明書配制各底物反應液和反應工作液,配制的溶液請立即使用,當天一次用完。初次使用本試劑盒,先做2~3張片做預實驗,之后盡快完成批量實驗。

1、底物反應液B1

1.1甲液配制:臨用前吸取甲粉溶解液(500μl)加入甲粉中,充分溶解,即得到甲液。

1.2乙液配制:臨用前吸取乙粉溶解液(500μl)加入乙粉中,充分溶解,即得到乙液。

1.3使用前,再將甲液和乙液混合,即得到底物反應液B1。


2、底物反應液B2

臨用前吸取丙粉溶解液(500μl)加入丙粉中,充分溶解,即得到底物反應液B2。


3、底物反應液B4

臨用前吸取丁粉溶解液(500μl)加入丁粉中,充分溶解,即得到底物反應液B4。

操作步驟

實驗前準備材料:蒸餾水,染缸,玻片,滴管,計時器,光學顯微鏡等


一、 樣本染色前處理

1.1 血液及骨髓涂片

j 推片:取新鮮血液或骨髓3μl左右置于載玻片上,推玻片與載玻片保持30°,置于血滴的正前方,稍往后移與血液接觸使后者沿推片下緣散開,再勻速沿載玻片平面平穩向前方滑動置鋪滿血膜為止。

k 自然晾干,再放入固定液中固定2~3min。

l 水洗約30~60s、稍微晾干(不易過分干燥)。

1.2 石蠟切片

j 二甲苯脫蠟5~10min,再換用新的二甲苯,重復一次。

k 無水乙醇5min,90%乙醇2min,70%乙醇2min,蒸餾水浸洗2min。

1.3 冰凍切片

j 回溫:將低溫保存的冰凍切片放置到切片架上于37℃回溫約5~10min。

k 水合:將回溫好的切片在水中浸泡1~2min。

l 固定:固定液固定5~10min。

m 水洗約30~60s、稍微晾干(不易過分干燥)。


二、 染色流程(染色缸孵育法)

2.1往染缸內加入30ml蒸餾水,37℃水浴10min。

2.2將現準備的底物反應液B1、B2、B3、B4依次加入預溫的蒸餾水中?;靹蚣吹玫剑悍磻ぷ饕?。

2.3將已固定、水洗且未完全干的玻片,立即放入反應工作液中,避光孵育60min。

2.4孵育完后,取出水洗1min,在玻片未完全干之前進行復染。用蘇木素染色液復染1~2min或甲基綠染色液復染2~3min。(此處復染液二選一即可)

2.5孵育完后,取出水洗10s,在玻片未完全干之前,即可用光學顯微鏡觀察或水溶性封固劑封片后待檢。


三、染色結果

陽性部位(酶活性部位)

鮮紅色或深紅色顆粒,定位胞漿

細胞核

藍色(蘇木素)或綠色(甲基綠)


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貨號

名稱

規格

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

 


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