目錄號 | MP7508-20T | 售價 | 680.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 20t | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | 保存溫度 | 室溫密封保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS號 | N/A | 有效期 | 3個月有效 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 抗酒石酸酸性磷酸酶染色(定性) | 訂購數量 |
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產品簡介:
Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit 抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒
產品信息
【重要提示】:為了保證試劑盒的工作性能,本試劑盒開封后,于實驗前嚴格按照說明書配制各底物反應液和反應工作液,配制的溶液請立即使用,當天一次用完。初次使用本試劑盒,先做2~3張片做預實驗,之后盡快完成批量實驗。
產品描述 酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP),是一類磷酸酯酶,在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個蛋白家族,哺乳動物中分子量從18kD到100kD不等。ACP主要分為兩類,一類為抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP),一類為抗氟酸性磷酸酶(Fluoride resistant acid phosphatase,FRAR)。
TRAP是一種糖基化的含金屬蛋白酶,在破骨細胞(Osteoclast)和破軟骨細胞(Chondroclast)中高表達,在活化的巨噬細胞和神經元中也有表達。存在于正常人肺泡巨噬細胞和白血病人脾臟的TRAP均在細胞濾泡中,并非釋放到血液中。血液中TRAP絕大部分來源于破骨細胞,因此,測量血液中TRAP可以了解破骨細胞的功能狀態。TRAP在細胞信號轉導、細胞增殖和分化等方面起重要作用,也和活性氧產生和鐵離子轉運等有關。
本抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Stain Kit, TRAP Stain Kit)以萘酚AS-BI為底物,酸性pH下被ACP水解生成磷酸和萘酚,萘酚與重氮鹽偶聯生成有色產物,定位于細胞質中。若細胞內ACP含抗酒石酸活性,則呈陽性反應。本品可用于新鮮血涂片/骨髓涂片、細胞爬片、冰凍切片和石蠟切片中的破骨細胞染色。本試劑盒可染20~30張片。
產品組成
保存與運輸方法 保存:室溫密封保存,3個月有效。務必知悉:所有應用液配制后即可使用,務必當天用完。 運輸:冰袋運輸。
注意事項 1) TRAP染色液易失效,請務必現配現用。 2) GBC染色液請不要置于-20℃凍存,需2-8℃避光保存。 3) 樣本需新鮮,取材后請立即處理,否則會影響酶活性。 4) 對于冰凍切片染色,應盡量減少切片在室溫暴露的時間。 5) 對于血液涂片,推薦皮膚穿刺血涂片,晾干后及時染色 6) 本品不建議用于石蠟切片染色。 7) 組織固定需在4℃冰箱進行,時間不要超過24h,否則酶活性會減弱或消失。 8) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
試劑準備 【務必知悉】:為了保證試劑盒的工作性能,本試劑盒開封后,于實驗前嚴格按照說明書配制各底物反應液和反應工作液,配制的溶液請立即使用,當天一次用完。初次使用本試劑盒,先做2~3張片做預實驗,之后盡快完成批量實驗。 1、底物反應液B1 1.1甲液配制:臨用前吸取甲粉溶解液(500μl)加入甲粉中,充分溶解,即得到甲液。 1.2乙液配制:臨用前吸取乙粉溶解液(500μl)加入乙粉中,充分溶解,即得到乙液。 1.3使用前,再將甲液和乙液混合,即得到底物反應液B1。
2、底物反應液B2 臨用前吸取丙粉溶解液(500μl)加入丙粉中,充分溶解,即得到底物反應液B2。
3、底物反應液B4 臨用前吸取丁粉溶解液(500μl)加入丁粉中,充分溶解,即得到底物反應液B4。 操作步驟 實驗前準備材料:蒸餾水,染缸,玻片,滴管,計時器,光學顯微鏡等
一、 樣本染色前處理 1.1 血液及骨髓涂片 j 推片:取新鮮血液或骨髓3μl左右置于載玻片上,推玻片與載玻片保持30°,置于血滴的正前方,稍往后移與血液接觸使后者沿推片下緣散開,再勻速沿載玻片平面平穩向前方滑動置鋪滿血膜為止。 k 自然晾干,再放入固定液中固定2~3min。 l 水洗約30~60s、稍微晾干(不易過分干燥)。 1.2 石蠟切片 j 二甲苯脫蠟5~10min,再換用新的二甲苯,重復一次。 k 無水乙醇5min,90%乙醇2min,70%乙醇2min,蒸餾水浸洗2min。 1.3 冰凍切片 j 回溫:將低溫保存的冰凍切片放置到切片架上于37℃回溫約5~10min。 k 水合:將回溫好的切片在水中浸泡1~2min。 l 固定:固定液固定5~10min。 m 水洗約30~60s、稍微晾干(不易過分干燥)。
二、 染色流程(染色缸孵育法) 2.1往染缸內加入30ml蒸餾水,37℃水浴10min。 2.2將現準備的底物反應液B1、B2、B3、B4依次加入預溫的蒸餾水中?;靹蚣吹玫剑悍磻ぷ饕?。 2.3將已固定、水洗且未完全干的玻片,立即放入反應工作液中,避光孵育60min。 2.4孵育完后,取出水洗1min,在玻片未完全干之前進行復染。用蘇木素染色液復染1~2min或甲基綠染色液復染2~3min。(此處復染液二選一即可) 2.5孵育完后,取出水洗10s,在玻片未完全干之前,即可用光學顯微鏡觀察或水溶性封固劑封片后待檢。
三、染色結果
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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