Tetramethylrhodamine Ethyl Ester (TMRE)

四甲基羅丹明乙酯

（線粒體膜電位熒光探針）

產品關鍵詞：

TMRE 四甲基羅丹明乙酯；4-Di-2-ASP；DASPEI；Styryl dye 苯乙烯染料；MitoTracker® Green FM；CAS NO：115532-52-0；

產品信息

【溫馨提示】：見我司懋康生物（maokangbio）提供的線粒體熒光探針產品專題。

產品描述

帶正電荷的羅丹明染料（比如羅丹明酯）選擇性定位在線粒體，因此，普遍用來標記活細胞線粒體。除了選擇性標記線粒體外，與JC-1一樣，四甲基羅丹明乙酯（Tetramethylrhodamine Ethyl Ester,TMRE）廣泛用來測定線粒體膜電位。TMRE在細胞膜不會形成聚集物，與膜蛋白的相互作用非常小。因此，該染料的跨膜分布與膜電位直接相關。TMRE的光譜特性類似于TRITC，使用起來相當方便。

產品特性

1） CAS NO.：115532-52-0

2） 化學名：3,6-bis(dimethylamino)-9-[2-(ethoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, perchlorate

3） 同義名：Tetramethylrhodamine ethyl ester perchlorate 四甲基羅丹明乙酯高氯酸鹽；TMR ethyl ester TMR乙酯；

4） 分子式：C26H27ClN2O7

5） 分子量：514.95

6） Ex/Em：549/574nm

7） 純度：≥95%

8） 溶解性：溶于DMSO

9） 化學結構式： 

保存與運輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少一年有效。 

運輸：室溫運輸。

注意事項

1） TMRE適合活細胞染色，但不適合固定細胞染色。

2） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟

1.儲存液制備

1.1將低溫保存的產品置于室溫回溫至少20min（此步非常重要，請勿忽略操作），低速離心片刻使粉末沉至管底。

1.2對于25mg粉末，往瓶內加入4.8548ml高質量無水DMSO配制成10mM儲存液；由于TMRE的使用濃度比較低，可再配制一個中間儲存濃度（比如：100μM），比如：取10μl TMRE（10mM）加入990μl DMSO，充分混勻后，即得到100μM的中間儲存濃度。

2.工作液制備

于正式實驗前，用無血清細胞培養基稀釋母液到適宜的工作濃度，比如：100nM。根據不同的實驗用途和細胞類型，TMRE的工作濃度范圍一般在20nM~1000nM，初次使用務必優化獲得最佳工作濃度。工作液需現配現用。

3.染色步驟（以熒光成像為例）

注①：對于熒光成像分析，常用的TMRE工作濃度范圍是50-200nM。

注②：如果需測定某藥物對膜電位的作用，需提前處理細胞，再用探針進行后續檢測。同時需要設置藥物未處理組和藥物處理組。

注③：如果需要陽性對照，可選擇FCCP（Cat#：MX3259）或CCCP（Cat#：MX3258），這兩種化合物都是解偶聯劑，能夠降低線粒體膜電位，從而防止TMRE染色。

3.1 培養細胞。

3.2去除培養基，用生理緩沖液比如PBS清洗1-2次。

3.3 加入新鮮配好的工作液完全覆蓋細胞。

3.4于37℃避光孵育15~45min。

3.5【可選】為了增高靈敏度，用PBS或類似緩沖液清洗細胞1~2次。

3.6 熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進行成像分析。

染色示例（來自文獻）

TMRE fluorescence decay upon FCCP treatment and the effect on (Ca2+)c.

(A) The representative micrographs showing a decay in TMRE fluorescence in a single cell after 30 s depolarization with 1 μM FCCP. Scale bar 10 μm. (B) Representative traces showing average FCCP-induced Fura-2 fluorescence increase due to release of mitochondrial Ca2+ in n?=?15, n?=?20, n?=?19 cells for C, _2, _3 lines, respectively. (C) Representative traces of average Fura-2 fluorescence showing lack of 6 μM oligomycin effect on (Ca2+)c in 14 cells.

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