ER-Tracker Blue-White DPX, for live-cell imaging

內質網藍色熒光探針（活細胞成像用）

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產品標簽

ER-Tracker Blue-White DPX 內質網藍色熒光探針；ER-Tracker Red; ER-Tracker Green; DiOC6(3)；CAS:53213-82-4；

產品信息

【溫馨提示1】：見我司懋康生物整理得溶酶體熒光探針（Lysotracker and Lysosensor）產品專題。

【溫馨提示2】：見我司懋康生物整理得線粒體熒光探針（Mitotracker）產品專題。

產品描述

ER-Tracker dyes是一系列細胞膜滲透性的活細胞染料，高度選擇性結合內質網（ER）。不同于傳統的內質網染料DiOC6(3)，該系列染料極少染色線粒體，且低濃度下染色無細胞毒性。使用提供的優化步驟對細胞染色和甲醛處理后，可以保留部分的活細胞染色特征。

ER-Tracker Blue-White DPX是Dapoxyl (DPX)染料家族的成員之一，這類染料具有長發射波長，高吸光系數，高量子產量和寬廣的斯托克頻移特征。這類染料屬于環境敏感型的探針，隨著溶劑極性的增加，最大熒光遷移到更長的波長，伴隨著光量子產量降低。

本品為DMSO儲存液，濃度為1mM。用于活細胞內質網染色，建議工作濃度為100nM-1μM，需根據實際情況做優化調整。

產品特性

1）   分子式：C26H21F5N4O4S

2）   分子量：580.5283

3）   外觀：黃色液體

4）   Ex/Em：374/430-640nm (in methanol)

5）   檢測濾片：DAPI or UV longpass

6）   化學結構式：

保存與運輸方法

保存：≤-20oC避光干燥保存，收到貨至少6個月有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）   整個染色過程中需注意避光。

2）   由于ER-Tracker Blue-White DPX是環境敏感型探針，會產生波動較大的發射吸收峰，在430-640nm之間出現。長通DAPI濾光片觀察效果最理想。 

3）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

以下實驗方案是根據牛肺動脈內皮細胞（BPAE）優化所得，且已驗證適用于其他常規細胞系的染色。建議以下步驟僅作起始實驗的參考，請根據具體的細胞類型和實際情況來優化標記條件。

1.      試劑準備

ER-Tracker Blue-White DPX以1mM的DMSO儲存液形式提供，使用前請將ER-Tracker Blue-White DPX 從冰箱內取出，確?；販刂潦覝睾?，經短暫離心將所有溶液沉到管底。

2.      細胞染色

2.1    制備染色工作液：將1mM ER-Tracker Blue-White DPX稀釋至工作濃度，建議工作濃度100nM-1μM。為了最小化染料過高引起的假象，建議使用能達到實驗目的的最低濃度來完成染色?！咀⒁狻浚涸诤珻a2+/Mg2+ 的Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg, Cat# MS3501-500ML）內進行染色可得到最佳結果。

2.2    細胞染色：對于貼壁細胞，吸除培養基，用HBSS清洗細胞，加入預熱的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養基，并在熒光顯微鏡下觀察細胞。如果細胞需要固定，請跳轉到步驟3。

3.      細胞固定及透化

3.1    固定和透化細胞：用4%甲醛于37℃固定細胞10-20min。ER-Tracker Blue-White DPX染色信號在甲醛固定后僅能部分保留下來。如果還需要做其他染色，細胞需用0.2% TritonX-100 透化處理10min。

3.2    清洗和觀察細胞：細胞固定后，用合適緩沖液清洗2次，每次5min。之后熒光顯微鏡下觀察。

染色示例

Fig 1. Live bovine pulmonary artery endothelial cells stained with ER-Tracker Blue-White DPX and MitoTracker Red CM-H2XRos. Live bovine pulmonary artery endothelial cells stained with ER-Tracker? Blue-White DPX and MitoTracker® Red CM-H2XRos. The endoplasmic reticulum appears green and the mitochondria appear orange. The image was acquired using a fluorescence microscope equipped with a triple-bandpass filter set appropriate for DAPI, fluorescein and Texas Red®dyes.

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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