DiOC₆(3)內質網熒光探針   《促銷中》

產品關鍵詞：

DiOC6(3)；壬基吖啶橙NAO；JC-10 線粒體膜電位探針；MitoTracker® Green FM 綠色線粒體熒光探針；羅丹明123 Rhodamine 123；CAS NO：53213-82-4；

產品信息

【溫馨提示】：見我司懋康生物（maokangbio）提供的線粒體熒光探針產品專題。

產品描述

DiOC6(3)，英文全名3,3'-Dihexyloxacarbocyanine Iodide，CAS NO. 53213-82-4，是一種具細胞膜滲透性、發綠色熒光的親脂性染料。作為一種膜探針，DiOC6(3)在高濃度下能對活細胞和固定細胞的內質網（高爾基體）染色，也能對囊泡膜和線粒體染色。而在更低濃度下，偏向選擇性染色線粒體。DiOC6(3)能用來標記活細胞，然而，由于光動力學毒性會快速破損，經其標記的細胞僅能短時間暴露在光下。神經元和酵母細胞中，DiOC6(3)曾用來研究內質網（ER）結構的相互作用和動力學；當染料濃度提高或在某些呼吸缺陷的酵母菌株內，DiOC6(3)能特異性染酵母核膜，而且具足夠靈敏性來揭式核膜（已知稱為karmellae）的變化。

應用特征

DiOC6(3), a carbocyanine dye from the DiOC family, cannot be exclusive to the mitochondrial membrane potential measurement in intact cells, except by dissipating the plasmatic and ER membrane potentials as well as the DpH. DiOC6(3) is widely used as a cytofluorometric DCm indicator. To produce rigorous and reproducible results, the dye and the cell concentrations have to be monitored with care. When DiOC6(3) is used at low concentrations (10–20 nM), this dye rapidly reaches equilibrium in the mitochondria with low quenching effects. The use of higher concentrations (more than 50 nM) may result in non-mitochondrial staining (plasma membrane and endoplasmic reticulum) and in fluorescence quenching. Moreover, similar to probes previously mentioned, the use of relatively high concentrations of dye leads to a high accumulation in the inner mitochondrial membrane, resulting in a quenching of the fluorescence and, occasionally, in an inhibition of either mitochondrial respiration or complex I (except for TMRM and TMRE) (30). Many factors, such as the cell/dye ratio, cell size variability or the magnitude of plasma membrane potential may affect the fluorescence intensity of cells stained with DiOC6(3) (31). If the cell population studied is homogeneous and asynchronous, this potential pitfall is not of crucial interest; otherwise, internal standards and normalization procedures have to be used to allow the detection of DCm dissipation and DiOC6(3) fluorescence decrease (30). [Reference: Cottet-Rousselle C et al. Cytometric assessment of mitochondria using fluorescent probes. Cytometry A. 2011 Jun;79(6):405-25.]

產品特性

1）   CAS NO.：53213-82-4

2）   化學名：Benzoxazolium, 3-hexyl-2-(3-(3-hexyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl)-, iodide

3）   同義名：3,3'-Dihexyloxacarbocyanine Iodide; DiOC6(3) Iodide;

4）   分子式：C29H37IN2O2

5）   分子量：572.52

6）   純度：≥97%（HPLC）

7）   Ex/Em：484/501nm（in methanol）

8）   外觀：紅色粉末或塊狀

9）   溶解性：溶于DMSO，DMF，無水乙醇，微溶于水

10）化學結構式：

保存與運輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少一年有效。

運輸：室溫運輸。

注意事項

1）   熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據具體的實驗條件和具體的應用來做出調整。

1.染色液制備

1）儲存液制備：用 DMSO或無水乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取10mg DiOC6(3)（Mw：572.52 g/mol）溶于3.49ml 無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液?！咀⒁狻课词褂玫膬Υ嬉悍盅b儲存在-20℃，避免反復凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度?！咀⒁狻浚汗ぷ饕鹤罱K濃度需要根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區間進行最優濃度的摸索。

2.懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3.貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。

2）從培養基中移走蓋玻片，濾掉過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養基。

4.顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR濾光器的選擇參見下表：

5.流式細胞儀檢測

經DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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