Rhodamine Phalloidin羅丹明標記鬼筆環肽

(Cytoskeleton Inc. PHDR1）

產品標簽

Phalloidin 鬼筆環肽；Actin-Stain^TM 488 Phalloidin；F-actin 肌動蛋白（聚合）；Actin filaments 肌動蛋白絲；Cytochalasin細胞松弛素；CAS NO.：17466-45-4；

基本描述

鬼筆環肽（Phalloidin），又稱鬼筆鵝膏素，是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七氨基酸多肽毒素，以極高親和力和特異性結合肌動蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動蛋白）（Kd=20nM）。鬼筆環肽將肌動蛋白聚合的臨界濃度降至≤1μg/ml，從而用作一種聚合增強劑。熒光探針標記的鬼筆環肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能對組織培養細胞、組織切片和無細胞制備物進行肌動纖維絲染色。經鬼筆環肽標記的肌動纖維絲仍能維持標記前的許多功能特征包括能夠與肌球蛋白相互作用。

產品應用

1. [Stain F-actin in fixed cells]; 對固定的組織切片和組織細胞培養物進行聚合形式肌動蛋白的熒光染色；

2. [Stabilize actin filaments in vitro] 體外穩定肌動蛋白絲；

3. [Visualize actin filaments in vitro] 體外可視化肌動蛋白絲；

鬼筆環肽（Phalloidin）用作實驗室研究工具的方法得到良好的闡述和驗證，歸功于其能抑制微絲去聚合（Microfilament depolymerization）的能力。由此，經Phalloidin穩定的微絲能用作底物來鑒定和歸類逐漸增加的微絲相關蛋白。另外，羅丹明標記的鬼筆環肽（Rhodamine Phalloidin）能用來對細胞肌動蛋白骨架進行染色，以及細胞運動實驗中用作微絲的熒光標志物/穩定劑。

產品特征

1. 外觀：粉末凍干粉；

2. 純度：>99%

3. 分子量：1306

4. 保存：凍干粉4℃干燥保存1年有效；儲存液-20℃避光保存半年有效；

5. 重溶方法：使用前簡單離心使得產品都降至管底，加入500μl 100%甲醇充分溶解后配置成14μM儲存液。建議按照10×50μl分裝，-20℃避光保存，穩定保存6個月。

6. 生物活性：本品的肌動蛋白絲穩定活性（Microfilament stabilizing property）相當于或更優于其他商業化同類型鬼筆環肽產品。用70nM Phalloidin標記的肌動蛋白絲室溫超過1周穩定保存。

應用實例

Fig 1.  羅丹明鬼筆環肽（Cytoskeleton, PHDR1）染色下的Swiss 3T3成纖維細胞。A Swiss 3T3 fibroblast stained with rhodamine phalloidin (PHDR1). The phalloidin binds specifically to F-actin and does therefore stain the actin stress fibers in the cell

使用方法【僅作參考】：

1. 免疫熒光（Immunofluorescence）

需要材料：1）Rhodamine Phalloidin（PHDR1）；2）蓋玻片爬片生長達到半匯合的Swiss 3T3細胞；3）PBS buffer；4）固定劑；5）破膜劑；7）抗熒光淬滅封片劑；8）100nM DAPI in PBS；11）載玻片；12）蓋玻片封固液（透明指甲油）；

操作流程：咨詢我司工作人員或詳見說明書。

2. 制備穩定的熒光標記肌動蛋白絲（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

體外肌動蛋白運動試驗（in vitro motility assays），穩定的熒光標記肌動蛋白絲是研究肌球馬達蛋白非常優秀的底物材料。Rhodamine phalloidin結合對肌球蛋白ATPase的肌動蛋白激活無影響。

需要材料：1）肌動蛋白Actin protein（#AKL99-A）；2）通用肌動蛋白緩沖液General Actin buffer（#BSA01）；3）10×聚合緩沖液Polymerization buffer（#BSA02）；4）Rhodamine phalloidin（PHDR1）；

操作流程：

 1. 用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通用肌動蛋白緩沖液來重懸兔肌肉肌動蛋白（rabbit muscle actin，#AKL99-A），使其濃度為1mg/ml。

2. 加入1/10體積的聚合緩沖液來聚合肌動蛋白，室溫孵育1h。

3. 用含70nM rhodamine phalloidin的聚合緩沖液按照1:100的比例稀釋聚合的肌動蛋白絲。

4. 吸取1ul標記好的肌動蛋白滴在已滴有一滴抗熒光淬滅劑的載玻片上。

5. 取一干凈蓋玻片蓋在液滴處，用紙巾吸掉多余液體。

6. 熒光顯微鏡觀察熒光纖維。肌動蛋白絲平均長度為5-40um，在4℃避光能穩定保存1周。

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【說明A】：本品500ul約可做300-350張細胞爬片；

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引用文獻（#PHDR1）：

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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