Aminophenyl fluorescein (APF) 

氨基苯基熒光素（金標產品，享發文獎勵）

產品信息

產品描述

氨基苯基熒光素（APF）和羥苯基熒光素（HPF）是由T. Nagano開發的兩種活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示劑，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更優秀的特異性和穩定性。APF和HPF顯示有限的非選擇性反應，和相對較高的光誘導氧化抗性。APF和HPF具細胞膜滲透性，本身無熒光，直到與羥基自由基或過氧亞硝基陰離子反應，還能與次氯酸陰離子反應，產生強綠色熒光（Ex/Em，~490/515nm），可用熒光顯微鏡、高通量成像儀、熒光酶標板或流式細胞儀檢測。

本品以粉末形式提供，可直接溶于DMF配制成5mM儲存液，常用工作濃度范圍1-10μM，需根據自身的實驗體系或參考文獻進行優化。

產品特性

1）同義名：3'-(p-aminophenyl) fluorescein氨基苯基熒光素

2）分子式：C26H17NO5

3）分子量：423.42

4）純度：≥95%

5）Ex/Em：490/515nm

6）溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）

7）化學結構：

保存與運輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

一、儲存液制備

將低溫保存的1mg粉末置于室溫回溫至少20min，之后加入472μl 無水DMF配置成5mM儲存液。充分溶解和混勻后，按照單次用量分裝，-20oC避光干燥保存，避免反復凍融。

【注】：APF能溶于DMSO（10mM），但有數據顯示DMSO是羥基自由基的淬滅劑，會干擾檢測和降低靈敏性。因此，建議用DMF作為溶劑。

二、溶液體系檢測

正式實驗前，取一管HPF儲存液置于室溫回溫，使其充分融解。之后用合適的緩沖液（比如HHBS緩沖液，PBS緩沖液）稀釋到所需的工作濃度。建議起始濃度為1-10μM，需根據自身的實驗體系或參考文獻進行優化。

三、細胞體系檢測

以下實驗步驟僅做參考，最佳的工作濃度、孵育時間和溫度需根據實際情況進行調整。在加入APF工作液之前按需處理細胞。

1）   根據具體用量，將DMF儲存液用HHBS緩沖液或其他生理緩沖液稀釋成1-10μM工作液。

2）   根據實驗設計處理細胞（比如，RASM細胞用50-100nM 血管緊張素II處理3-5h）。

3）   取步驟1）準備的1-10μM工作液加入細胞，37oC孵育20-60min。

4）   吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理緩沖液替換。

5）   用合適的熒光儀器（Ex/Em=492/515nm）來檢測。

【注1】：BSA和酚紅會影響熒光，需謹慎使用。

【注2】：HPF和APF能用于溶液體系或胞內ROS檢測。

注意事項

1）APF和HPF僅用于科研研究，不可用于體外診斷研究。

2）APF和HPF產生的熒光相對于其他活性氧探針比如DCFH弱很多，這是探針本身的特性決定的（見附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物質的反應特異性）。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

相關產品

附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對各種活性氧物質的反應特異性

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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文獻引用：

【1】Wu Q et al. Cascade enzymes within self-assembled hybrid nanogel mimicked neutrophil lysosomes for singlet oxygen elevated cancer therapy. Nat Commun. 2019 Jan 16;10(1):240.

The aminophenyl fluorescein (APF) as the HClO detector were purchased from Shanghai Maokangbio. The further EDT related therapeutic species including the ROS, 1O2 and the intermediate HClO have been detected in tumour tissues of different groups by using the corresponding fluorescent probes, DCFH-DA, SOSG and aminophenyl fluorescein (APF, as HClO detector).

【2】Juan J et al. Dynamic tracking of bulk nanobubbles from microbubbles shrinkage to collapse. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. Volume 589, 20 February 2020, 124430

3′- p - (aminophenyl) fluorescein (APF) was purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. (shanghai, China).

【3】Yahui Zhang, Weizhou Sha, Yang Liu, Wei Wang, Zhi Yuan. A facile composite nanoparticle promoted by photoelectron transfer and consumption for tumor combination therapy. Mater. Chem. Front., 2020,4, 3047-3056  https://doi.org/10.1039/D0QM00447B

3′-(p-aminophenyl) fluorescein (APF) was purchased from maokang-bio (Shang hai).

【4】Li L, Shao C, Liu T, Chao Z, Chen H, Xiao F, He H, Wei Z, Zhu Y, Wang H, Zhang X, Wen Y, Yang B, He F, Tian L. An NIR-II-Emissive Photosensitizer for Hypoxia-Tolerant Photodynamic Theranostics. Adv Mater. 2020 Nov;32(45):e2003471. doi: 10.1002/adma.202003471. Epub 2020 Oct 7. PMID: 33029855.

2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate (DCFH-DA), aminophenyl fluorescein (APF), and singlet oxygen sensor green (SOSG) were obtained from Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. (Shanghai, China).

【5】Liu J, Yuan Y, Cheng Y, Fu D, Chen Z, Wang Y, Zhang L, Yao C, Shi L, Li M, Zhou C, Zou M, Wang G, Wang L, Wang Z. Copper-Based Metal-Organic Framework Overcomes Cancer Chemoresistance through Systemically Disrupting Dynamically Balanced Cellular Redox Homeostasis. J Am Chem Soc. 2022 Mar 23;144(11):4799-4809. doi: 10.1021/jacs.1c11856. Epub 2022 Feb 22. PMID: 35192770. 

(APF, ?OH) (Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd.)

HCT116/L-OHP or HCT116 cells

【6】Nuo Yu, Wenzhi Tu, Pu Qiu, Qian Ren, Xuming Chen, Meifang Zhu, Yong Liu, Zhigang Chen, Full-route advances via biomimetic and biodegradable ultrasmall-in-nano architectures with radiation-photo synergy,

Nano Today,Volume 43,2022,101427,ISSN 1748-0132, https://doi.org/10.1016/j.nantod.2022.101427.

APF),

1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) were purchased from Shanghai Maokang Biotechnology Co., LTD