Yeast Transformation Kit II for Saccharomyces cerevisiae  

酵母轉化試劑盒（用于釀酒酵母）

【通知】：本試劑盒自2024/4月開始升級到第二代，在第一代試劑盒的基礎上添加感受態凍存液，一改第一代試劑盒中感受態現做現用的嚴格要求，用戶能更靈活的調整感受態制備和轉化的時間，更人性化。同時，維持包裝規格的基礎上，維持原價格。

產品信息

【溫馨提示】：見我司懋康生物整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產品專題。

產品描述

本酵母轉化試劑盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸鋰（PEG/LiAc）方法來制備和轉化酵母菌感受態細胞的一款試劑盒，操作簡單快捷，適用菌株廣泛，能用于多個質粒的共同轉化。每個試劑盒可做200次質粒的轉化。

本品基于第一代試劑盒做出升級，新增感受態凍存液，這樣制備好的感受態不用現做現用，能置于-80℃穩定保存6-12個月。

產品組分

保存與運輸方法

保存：Carrier DNA置于-20oC保存，其他室溫保存，1年有效。 

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 第一次使用Carrier DNA，需要將裝Carrier DNA的整個管子置于沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，之后放在-20oC保存。下次使用時需在冰上解凍Carrier DNA。

2） PEG溶液低溫情況下會析出，使用前最好常溫溫育確保完全溶解才使用。

3） 酵母轉化整個過程請無菌操作。

4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 酵母感受態細胞的制備

1.1 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固體培養基上劃線，30℃培養2-4天以活化菌種。

1.2 挑取酵母單菌落在YPDA固體培養基上劃3-5mm短線，30℃培養2-4天。待酵母單菌落生長至2mm時，接種。

1.3 挑取酵母單菌落接種到3ml YPDA液體培養基，30℃培養過。

1.4 第二天轉接到含50ml YPDA液體培養基的三角瓶中繼續培養，直至OD600達到0.5-0.8范圍。4000rpm離心5min收集細胞，去上清。

1.5 用30ml無菌去離子水重懸沉淀細胞。4000rpm離心5min，去上清。

1.6 沉淀用1.5ml的100 mM LiAc重懸（100 mM LiAc：150μl 1M LiAc+1350μl 無菌水混勻即可】，之后轉移到1.5ml離心管內。4000rpm離心5min，去上清。

1.7 用1.0ml凍存液重懸沉淀，此時，即得到所需的酵母感受態細胞。按50μl（或100μl）分裝到1.5-2ml無菌凍存管內，或直接轉化，或進行凍存?！咀⒁狻浚喝绻M行文庫轉化，按600μl/管分裝。

1.8 按照緩慢冷凍的方法（二選一）：①將感受態放入程序降溫盒內，再放到-80℃冰箱過夜，之后取出置于-80℃保存；②將感受態用多層紙包好放入泡沫盒內，再放于-80℃冰箱過夜，之后取出置于-80℃保存。感受態至少6個月穩定?！咀⒁狻浚壕徛齼龃媸潜４鎯龃婧蟾惺軕B細胞轉化效率的關鍵步驟。

二、酵母質粒轉化

2.1按照以下體系制備轉化用混合液，每個轉化反應需310μl的混合液。

2.2 取310μl轉化混合液加入上述制備好的1管感受態細胞（50-100μl/管），用槍輕輕反復吹吸菌體，使得管底的酵母細胞充分懸浮。

2.3 置于30℃水浴鍋孵育30min，每10min輕輕混勻一次。

2.4 置于42℃水浴鍋熱激30min，每10min輕輕混勻一次。

2.5 12000rpm離心15s，去掉上清液。

2.6 【可選步驟】用1ml YPD plus（MS6309-50ML）重新懸浮沉淀，30℃搖床震蕩培養30-60min。12000rpm離心15s，去掉上清液?！咀⒁狻浚恨D化產物使用YPD Plus復蘇，轉化效率可提高50-100%。若想提高現有酵母的轉化效率，推薦進行此步操作。

2.7 往沉淀內加入100μl無菌去離子水，重新懸浮沉淀。并轉移到相應的酵母培養平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，30℃培養2-4天。

三、酵母文庫轉化

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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