| 目錄號 | MX4801-1KIT | 售價 | 468.00元 | ||||||||||||||||||||||||
| 規格 | 100~500T | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | ||||||||||||||||||||||||
| 其他名稱 | ROS Assay Kit | 保存溫度 | -20ºC保存 | ||||||||||||||||||||||||
| CAS號 | 4091-99-0 | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 細胞活性氧水平檢測 | 訂購數量 |
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產品簡介: Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）檢測試劑盒
搜索關鍵詞： Reactive Oxygen Species，ROS活性氧；DCFH-DA；JC-1線粒體模電位探針；JC-10；CAS NO：4091-99-0；
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研究意義： 活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，參與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。
產品描述： 活性氧檢測試劑盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit，或ROS Assay Kit）是一種利用熒光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate）進行細胞內活性氧水平檢測的常用方法。檢測原理在于DCFH-DA本身無熒光，能自由穿過細胞膜，一旦進入細胞后，被胞內的酯酶水解生成無熒光的DCFH。DCFH不能穿透細胞膜，從而保留在胞內。此時胞內的活性氧可以氧化DCFH生成有熒光的DCF。通過DCF熒光的強弱即可反映活性氧的水平。
本試劑盒包含活性氧陽性對照Rosup，利于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物，濃度為50mg/ml。因檢測對象和反應體系的不同，本試劑盒可檢測100-500個樣品。
產品組成：
保存與運輸方法： 保存：-20oC保存，有效期一年。 運輸：冰袋運輸。
使用方法 1. 裝載探針 【注意】：對于刺激時間較短（通常2h以內）的細胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照Rosup和/或待研究藥物刺激細胞；對于刺激時間較長（通常6h以上）的細胞，先用活性氧陽性對照Rosup或待研究藥物刺激細胞，后裝載探針。
1.1 原位裝載探針（僅適用于貼壁細胞） 1）檢測前一天進行細胞鋪板，確?；钚匝鯔z測當天細胞匯合率達到50~70%。 2）吸出細胞培養液，加入適量體積以及濃度的待研究藥物，于37oC細胞培養箱內孵育，具體誘導時間根據細胞類型和藥物自身特性決定。 【可選】陽性對照Rosup：先用無血清培養液按照1:1000比例稀釋陽性對照，通常37℃培養箱內刺激20~30min可以觀察到顯著的活性氧水平提高，但依細胞類型會有比較明顯差異【刺激時間可參考文獻或實驗經驗來調整】。如果刺激后30min內未觀察到活性氧水平升高，可以適當提高Rosup的工作濃度；反之，如果活性氧升高過快，則適當降低Rosup的工作濃度。 3）按照1:1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA（10mM），使其終濃度為10μM.。吸出細胞培養液，加入適當體積DCFH-DA工作液?！咀⒁狻浚?/strong>加入體積以能充分蓋住細胞為宜。對于6孔板，每個孔加入DCFH-DA工作液不少于1ml。對于96孔板，每個孔加入DCFH-DA工作液不少于0.1ml。 4）37oC細胞培養箱內孵育20min。 5）用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。
1.2 收集細胞后裝載探針 1）按照常規方法，清洗并收集足量的細胞?！咀⒁狻浚?/span>保證細胞的狀態健康。 2）用適量體積以及濃度的待研究藥物重新懸浮細胞，于37oC細胞培養箱內孵育，具體誘導時間根據細胞類型和藥物自身特性決定。【可選】陽性對照Rosup：先用無血清培養液按照1:1000比例稀釋陽性對照，通常37℃培養箱內刺激20~30min可以觀察到顯著的活性氧水平提高，但依細胞類型會有比較明顯差異【刺激時間可參考文獻或實驗經驗來調整】。如果刺激后30min內未觀察到活性氧水平升高，可以適當提高Rosup的工作濃度；反之，如果活性氧升高過快，則適當降低Rosup的工作濃度。 3）探針裝載前，按照1:1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA（10mM），使其終濃度為10μM.。 4）離心，吸出細胞內刺激藥物，之后用適量DCFH-DA工作液重懸細胞，使得細胞密度為1×106~2×107/ml?！咀⒁狻浚?/strong>細胞密度需根據后續檢測體系，檢測方法，以及檢測總量來調整。例如，對于流式分析，單管檢測內細胞數目控制在104~ 106之間。 5）37oC細胞培養箱內孵育20min。每隔3~5min顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。 6）用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。
2. 檢測 2.1 原位裝載法 可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。 2.2 收集細胞后裝載法 可用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測，也可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。
3. 參數設置 使用488nm激發波長，525nm發射波長，實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似，可用FITC的參數設置檢測DCF。
4. 其他說明 1）對于某些細胞，若發現沒有刺激的陰性對照細胞熒光也比較強，可以按照1:2000～1:5000稀釋DCFH-DA，使DCFH-DA的工作濃度為2～5μM。探針裝載時間也可依情況在15～60min內適當進行調整。 2）Rosup僅僅用于作為陽性對照的樣品，并不是在每個樣品中都需加入Rosup陽性對照。
注意事項 1）探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內的探針，否則會導致背景較高。 2）探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發波長的掃描和發射波長的掃描，以確認探針的裝載情況是否良好。 3）盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間（刺激時間除外），以減少各種可能的誤差。 4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
— — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
【1】 Wang YW et al. Screening of Duck Tembusu Virus NS3 Interacting Host Proteins and Identification of Its Specific Interplay Domains. Viruses 2019, 11(8), 740;
HEK293 cells were first transfected with pCAGGS and pCAGGS-PRDX1. When PRDX1 was highly expressed for about 24 h, cells were infected with DTMUV and treated for 6 h, whereas the Rosup positive control group was set in parallel. Finally, the probe of DCFH-DA was diluted at 1:1000 and treated at 30 °C for 20 min referring to the ROS Assay Kit (MKBio, Shanghai, China). Cells were then observed under a fluorescent inverted microscope immediately.
【2】Zhi-Hao Hu, Guo-Jun Wang, Rui-Xin Li, Tian-Yu Zhu, Zhuo-Yin Wang, Heng-Xuan Ding, Xiu-Mei Hu, Upregulation of miR-133a-3p enhances Bufothionine-induced gastric cancer cell death by modulating IGF1R/PI3K/Akt signal pathway mediated ER stress, Life Sciences, 10.1016/j.lfs.2020.118180, (118180), (2020).
The DCFH-DA ROS assay kit (MKBio, Shanghai, China) was used to measure the ROS levels of the GC cells. In brief, GC cells were prepared and incubated with 5 μM DCFH-DA staining solution in the dark for 30 min at 37 °C.
The DCFH-DA ROS assay kit (MKBio, Shanghai, China) was used to measure the ROS levels of the GC cells. In brief, GC cells were prepared and incubated with 5 μM DCFH-DA staining solution in the dark for 30 min at 37 °C.
[3]Liu, Y.; Xiao, S.; Sun, H.; Pei, L.; Liu, Y.; Peng, L.; Gao, X.; Liu, Y.; Wang, J. AtPPRT1, an E3 Ubiquitin Ligase, Enhances the Thermotolerance in Arabidopsis. Plants 2020, 9, 1074.
The ROS production in the seedlings was detected by using fluorescent dye 2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (H2DCFDA) (Maokang, Shanghai, China), as described previously [32]. The 7-day-old different-genotype seedlings grown on MS solid medium were exposed to 45 °C for 3 h, and the seedlings were collected and stained at 22 °C for 15 min in 50-μM H2DCFDA (dissolved in MES-KCl buffer, MES 10 mM, KCl 50 mM, adjust to pH 5.5 with HCl). The seedlings washed with distilled water were placed under a Leica confocal microscope. The fluorescence in cotyledons and roots of seedlings were detected by using an excitation wavelength of 488 nm
[4]Shen LD, Qi WH, Bai JJ, Zuo CY, Bai DL, Gao WD, Zong XL, Hao TT, Ma Y, Cao GC. Resibufogenin inhibited colorectal cancer cell growth and tumorigenesis through triggering ferroptosis and ROS production mediated by GPX4 inactivation. Anat Rec (Hoboken). 2021 Feb;304(2):313-322. doi: 10.1002/ar.24378. Epub 2020 Feb 7. PMID: 31961485.
The intracellular ROS levels in CRC cells were measured by using the
[5]Yan, W., Zhang, Y., Hu, L. et al. Febuxostat Inhibits MPP+-Induced Inflammatory Response Through Inhibiting the JNK/NF-κB Pathway in Astrocytes. Neurotox Res 39, 566–574 (2021). https://doi.org/10.1007/s12640-020-00316-8
The astrocytes were planted on 24-well cell culture plates at a density of 1 × 10 5 cells/well for 24 h. After necessary stimulation, cells were loaded with 5 μM DCFH-DA (MX4802, MKBio, China) and incubated for 30 min in darkness.
[6] Huang X, Chu C, Shi C, et al. Seeing is believing: Efficiency evaluation of multifunctional ionic-dependent AIEgens for tuberculosis. Biomaterials. 2023 Nov;302:122301. DOI: 10.1016/j.biomaterials.2023.122301. PMID: 37690379. The Reactive Oxygen Species Assay Kit (DCFH-DA) was obtained from Maokangbio (Shanghai, China),
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