Alkaline Phosphatase Staining Kit for Stem Cell

堿性磷酸酶染色試劑盒（干細胞專用）

產品標簽：

Phosphatase, Alkaline 堿性磷酸酶；ALP/AKP；對硝基苯酚磷酸鹽（pNPP）；偶氮偶聯法；顯色法（定量）；染色法（定性）；

產品信息

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【溫馨提示III】：見堿性磷酸酶活性檢測試劑盒產品專題；

【溫馨提示IV】：見堿性磷酸酶常用生化底物及試劑盒產品；

產品描述

處于未分化狀態的胚胎干細胞（ES）和誘導多潛能干細胞（iPS）典型特征是呈高水平的堿性磷酸酶表達，同時結合其他的一些表面標志物，來顯示未分化細胞具自我更新的潛能。堿性磷酸酶（ALP，或AP）是一種水解酶，堿性條件下能夠將核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化作用。固定ES或iPS用堿性磷酸酶染色試劑盒染色后，未分化細胞呈紅/紫色，而分化細胞呈無色。

本堿性磷酸酶染色試劑盒特異性強，靈敏度高，可為ES/iPS細胞分化的表型評估提供可靠的依據。對于其他細胞來說，染色越深，表明細胞內ALP活性越高。以24孔板染色為例，分別可做50次和100次染色。

產品組分

保存與運輸方法

保存：2-8℃保存，6個月穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟（以24孔板染色為例）

1. 實驗前準備材料：PBST緩沖液、PBS緩沖液

2. 染色工作液準備：按照如下比例【溶液A: 溶液B: 溶液C=1:1:1】，配制適量染色工作液。請務必根據單次實驗用量制備染色工作液。為了保證最佳染色結果，需在配制30min內用完染色工作液，多余染色工作液請丟棄。

3. 染色步驟

1. 吸出細胞培養液，PBST洗2~3次，用0.5ml固定液室溫固定2~5min?！咀⒁狻浚汗潭ú灰^5min，過度固定會導致ALP失活）。

2. 吸出固定液，PBST洗2次；

3. 吸出PBST。加入0.6ml/孔染色工作液覆蓋細胞，室溫避光放置5~15min；【注意】：染色過程需密切監督顏色變化，當顏色很明亮即可終止反應，否則會引起非特異性染色。

4. 吸出染色工作液，用PBS洗2次，最后保存于PBS或封片劑內防止干燥，顯微鏡下觀察染色結果。結果判定：未分化細胞染色呈紅/紫色，分化細胞染色呈無色。

5. 將平板保存在4℃。

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引用文獻：

[1]Li, Z., Zhao, H., Chu, S. et al. miR-124-3p promotes BMSC osteogenesis via suppressing the GSK-3β/β-catenin signaling pathway in diabetic osteoporosis rats. In Vitro Cell.Dev.Biol.-Animal 56, 723–734 (2020). https://doi.org/10.1007/s11626-020-00502-0

An Alkaline Phosphatase Staining Kit (MP7503-50T, MKBio, Shanghai, China) was used for ALP staining. The cells were seeded into a 6-well plate, fixed with 4% paraformaldehyde (pH 7.4) for 1–2 min, and washed twice with phosphate buffered saline (PBS) and tris buffered saline with tween (TBST).

41.   Zhang X, Hong K, Sun Q, Zhu Y, Du J. Bioreducible, arginine-rich polydisulfide-based siRNA nanocomplexes with excellent tumor penetration for efficient gene silencing. Biomater Sci. 2021 Jun 28. doi: 10.1039/d1bm00643f. Epub ahead of print. PMID: 34180478.

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