Luminol 魯米諾

產品標簽

Luminol 魯米諾；HRP Substrate過氧化物酶底物；活性氧 ROS；Lucigenin 光澤精；Chemiluminescent substrate 化學發光底物；CAS：521-31-3；

產品信息

功能描述

檢測過氧化物酶的一種化學發光底物（免疫實驗，細胞實驗），一種金屬離子介導的氧化反應的優秀探針

產品描述

魯米諾（Luminol），也稱為3-氨基苯二甲酰肼（3-Aminophthalhydrazide），是過氧化物酶（PO, HRP）的一種化學發光底物，也能靈敏檢測反應性氧化物（ROS）。

辣根過氧化物酶（HRP）是抗體的一種常用標志酶，在過氧化氫（H2O2）存在的體系能夠催化魯米諾的化學發光氧化反應。此轉化實驗用于超靈敏的ELISA實驗，使用超靈敏的閃爍計數器能檢測到低水平的冷光。魯米諾還能用于許多其他反應體系，結合HRP/H2O2的其他酶體系。魯米諾能用作刑事偵查中的血液染色劑。

魯米諾和H2O2的混合溶液一旦接觸到血紅蛋白，血紅蛋白內的鐵離子加速魯米諾的化學發光氧化反應。魯米諾還能用作金屬離子介導的氧化事件的化學發光檢測探針，但是活細胞推薦用MCLA檢測。

產品特性

1）   CAS NO：521-31-3

2）   化學名：5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione 5-氨基-2,3-二氫-1,4-二氮雜萘二酮

3）   同義名：3-Aminophthalhydrazide 3-氨基苯二甲酰肼；發光氨；NSC 5064；

4）   分子式：C8H7N3O2

5）   分子量：177.16

6）   純度：≥98%

7）   外觀：類白色至淡黃色粉末，有時帶褐色或綠色光澤

8）   溶解性：易溶于堿溶液，DMSO（50mg/ml），溶于熱乙酸，乙醇和乙醚，幾乎不溶于水

9）   化學結構圖： 

保存與運輸方法

保存：室溫避光保存，3年有效。

運輸：室溫運輸。

注意事項

1）   魯米諾基本不溶于水，但易溶于堿性溶液（飽和溶解~200mg/ml）。魯米諾溶液對光和金屬離子不穩定。魯米諾熱不穩定，魯米諾和魯米諾溶液保存的過程中需要避光和高溫。

2）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用參考

1．  基于HRP的免疫實驗（HRP Immunoassays）

堿性溶液中魯米諾立即被氧化，以可見光的形式釋放能量。該反應可在各種溶液體系內進行，包括水和非質子溶劑（DMSO或DMF），氧化機制根據溶劑會有變化，對需要的反應條件稍有差異。在非質子溶劑體系，僅需要分子氧和一個強堿基即可產生化學發光（λmax = 485 nm）。在水溶性體系，需要一個強堿，或分子氧或過氧化物和一個助氧化劑比如次氯酸鹽或過硼酸鹽來產生化學發光（λmax = 425 nm）。產生熒光的實際化合物是氨基鄰苯二甲酸根離子（aminophthalate）(見下魯米諾反應機理圖1)。

圖1. 魯米諾反應機理圖。此反應魯米諾溶于含少量二價硫酸銅的堿性溶液，并與弱氧化劑（0.3% H2O2）反應。首先，堿性溶液中魯米諾轉化成共振穩定的二價陰離子1，然后被H2O2氧化成二羧酸離子2，伴隨分子氮N2的釋放。當分子2形成后，處于激發電子態（高能量），通過釋放光分子（hv）來排泄“多余”的能量，使得分子回到基態3。

2．  血液推定實驗（Presumptive test for blood）

加3.5g過硼酸鈉到500ml蒸餾水使之完全溶解，再加25g碳酸鈉和9.5g魯米諾使其溶解。之后靜置溶液5min，使得任何不溶物沉降。然后將溶液倒入塑料噴壺內，待用。

使用時，以細霧的形式噴灑在待檢測表面。真正的血跡會發冷光，呈穩定的光澤持續幾秒。為了更好的觀察，背景場景需盡可能的黑暗。值得注意的是此測試僅是推定的，由于該反應使用血紅素內的鐵離子催化氧化和后續的發光。而銅離子污染物的存在會加速氧化。

3．  魯米諾對銅離子的分析實驗血液推定實驗（Analytical test for copper - Luminol）

3.1試劑配制：溶解0.1g魯米諾到10ml濃氨，之后用蒸餾水稀釋到100ml。使用前，取1ml上述溶液加入4ml蒸餾水，并與0.5ml 0.3% H2O2混合均勻。取0.5ml溶液到一小測試管內，往內加入含銅離子或鐵離子的待測溶液。當待測液內至少含0.13ug銅離子或0.25ug鐵離子情況下，能觀察到待測液發藍紫色光。稀釋下限是1：2500000。用定量光度計檢測來建立標準曲線。

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