Luc報告基因底物/ D-Luciferin熒光素鈉鹽/超純級別

活體成像研究/體外生物發光研究/轉錄水平研究（金標產品，享發文獎勵）

搜索關鍵詞：

Luc reporter gene 報告基因；In vivo imaging 活體成像研究；轉錄水平研究；熒光素酶/ATP水平研究；報告基因質粒；報告基因病毒顆粒；螢火蟲熒光素；甲蟲熒光素；CAS：103404-75-7；

基本描述：

D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術領域，特別是體內活體成像技術。作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，D-熒光素（底物）被氧化發光。當熒光素過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染進入細胞后，導入研究動物如大小鼠體內，之后注入熒光素，通過生物發光成像技術（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。

基本應用：

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。

常見商業化類型的差異（熒光素鉀，鈉，游離酸）：

目前市場上有三種產品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素（鈉鹽），和D-熒光素（鉀鹽）。這三種產品主要差別在于溶解特性。

1）D-熒光素（游離酸）在水以及緩沖體系內的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。

2）D-熒光素（鈉鹽）和D-熒光素（鉀鹽）能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內實驗。配成溶液后的三種產品，在絕大多數應用上都沒有實質性的差別。

3）D-熒光素（鈉鹽）和D-熒光素（鉀鹽）基本上沒有差別，主要是使用習慣等因素影響。整體來看，鉀鹽的應用文獻明顯多于鈉鹽。

基本特性：

1）CAS NO：103404-75-7

2）化學名：(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid sodium salt; D-Luciferin firefly, sodium salt monohydrate;

3）分子式：NaC11H7N2O3S2· H2O

4）分子量：320.32 g/mol

5）純度：＞99% (HPLC)，分子生物學級（超純）

6）外觀：淺黃色至黃色粉末

7）溶解性：溶于水（高達100 mg/ml）

使用方法：

A．體外生物發光檢測

1）  儲存液制備

用蒸餾水溶解D-熒光素（鈉鹽），配制成15mg/ml的儲存液（100×），混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。建議使用的工作液濃度為150μg/ml（相當于468μM）。

2）  熒光素酶反應緩沖液制備

配方【1×，參考Yuichi Oba, et al., 2003】：100mM Tris-HCl（pH 7.8），5mM MgCl2，250μM CoA，150μM ATP。具體緩沖液組成可參考其他文獻資料來調整。按照以上配方制備熒光素酶反應緩沖液（2×）。

3）  收集細胞裂解上清（熒光素酶表達）

根據需要檢測的細胞類型，選擇合適的裂解液進行細胞裂解，離心收集上清后續檢測待用。

4）  螢火蟲熒光信號檢測

【注①】：螢火蟲熒光信號的檢測方法大體上取決于冷光測定儀（luminometer）類型（是手動型熒光計、單管注射型或者酶標板讀數型熒光計）。根據特定發光測定儀，來考慮注射用量和程序設置。

【注②】：需設置不含熒光素酶的孔（用作陰性對照），以測定背景熒光。

例：注射式冷光測定儀（injectible luminometer，單樣或微孔板，200μl終體積）

a）吸取100μl熒光素酶反應緩沖液（2×）到一干凈的冷光測定儀比色皿或96孔板的各孔（最好使用全白平底的96孔板）；

b）吸取50~98μl裂解上清到皿或孔內；

c）如果有需要，用水來補足使得總體積到198μl；

d）設置程序注射2μl熒光素儲存液（使工作濃度150μg/ml），程序：2~5秒延遲（delay），之后10s測定。

B．活體成像分析

1）用無菌的PBS（w/o Mg2+）或者DPBS（w/o Mg2+）配制D-熒光素（鈉鹽）工作液（15mg/ml），0.2μm濾膜過濾除菌?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

2）注射量取決于注射方式，具體如下：

3）注射入體內10-20 min（待光信號達到最強穩定平臺期），再進行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。

產品訂購：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 。網站：www.worley-valve.com.cn。

相關產品：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 。網站：www.worley-valve.com.cn。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

      上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。