| 目錄號 | MX0942-100UG | 售價 | 4786.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 規格 | 100μg | 運輸溫度 | 冰袋運輸 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名稱 | 保存溫度 | -20℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS號 | N/A | 有效期 | 6個月 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 訂購數量 |
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產品簡介: Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF647-conjugated 重組霍亂毒素B亞基（CF647標記，深紅色熒光）
產品信息
背景描述 霍亂毒素（Cholera toxin，CTX）是霍亂弧菌產生的毒力因子，會引起嚴重腹瀉以及人體脫水。CTX屬于AB5亞基家族。天然六聚體蛋白含兩個亞基，分子量約85kDa。由一個A亞基（約27.2kDa）和五個B亞基（約11.6kDa/亞基）組成，B亞基以五聚體環的方式排列，呈明顯的五度對稱，負責毒素識別并吸附細胞表面的神經節苷脂GM1。
A亞基催化刺激性G蛋白α亞基（Gαs）的ADP核糖基化，降低GTPase活性和活化α亞基。Gαs的活化引起腺苷酸環化酶（AC）活性增加，進而促使cAMP水平提高。A亞基還能ADP核糖基化視桿細胞外節膜盤的轉運蛋白，使得GTPase失活?；魜y毒素還是一種高效的黏膜疫苗佐劑，通過抑制IL-12生產來誘導2型輔助性T細胞的免疫應答。
霍亂毒素B亞基（CTB）對細胞無毒，本質上不含腺苷酸環化酶活性。CTB通過結合神經節苷脂GM1附著到細胞上，是小膠質細胞的良好標記物（這類細胞表面富含神經節苷脂GM1），但不適合標記少突膠質細胞或星形膠質細胞。CTB是利用組化方法研究軸突運輸的優秀示蹤劑。CTB也是常用的脂筏標記物，脂筏是富含膽固醇和鞘脂的膜微區，在細胞信號轉導和蛋白質運輸中發揮重要作用。
產品描述 本品是偶聯上深紅色熒光素-CF647（Ex/Em=650/665 nm）的重組霍亂毒素B亞基（rCTB），即Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF647-conjugated，簡寫：CF647 conjugated- rCTB，適用于神經學研究中的束路追蹤，靶向神經節苷脂GM1）結合和逆行運輸。也可在活細胞或固定細胞成像中用作脂筏標記物和內吞示蹤劑。
保存與運輸方法 保存：-20℃保存，至少6個月有效。 運輸：冰袋運輸。
注意事項 1） 本品以凍干粉形式提供，由于量比較少，初次使用前需置于室溫回溫至少30min，低速離心后，再開蓋直接往瓶內加入合適的溶劑進行溶解。 2） CF系列熒光染料是Biotium的注冊商標，Alexa Fluor和DyLight系列染料是Thermo Fisher的注冊商標，Cy系列染料是Cytiva的注冊商標。 3） 本品僅供科研用途，絕不可以用于臨床或診療用途。 4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法 以下是用熒光標記的rCTB對細胞進行標記的實驗流程。對于其他的應用（比如：神經示蹤），請根據應用查找相應的文獻作為參考。 一、 自行準備材料 1.1 磷酸鹽緩沖液（PBS）（比如：MS3552-500ML） 1.2 牛血清白蛋白（BSA）（比如：MP6101-5G） 1.3 HBSS（比如：MS3505-500ML） 1.4 4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML） 1.5 【可選】Hoehcst 33342（比如：MX4203-10MG，MX4203-1ML，MX4204-10ML）
二、 染料準備 重溶：將低溫保存的CF647 conjugated- rCTB（規格：100μg）置于室溫回溫至少30min，低速離心3-5min，將粉末離心至管底。直接往瓶子加入100μl無菌水或1×PBS使其充分溶解，即得到1mg/ml的母液。 保存：新鮮制備的CF647 conjugated- rCTB（1mg/ml）置于+4℃避光保存，3個月穩定。亦可根據單次用量分裝后，置于-20℃避光保存，6個月穩定，避免反復凍融。
三、 活細胞的表面標記 3.1用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA清洗細胞一次； 3.2用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA稀釋CF647 conjugated- rCTB（1mg/ml）到工作濃度：400ng/ml-1μg/ml。 3.3吸走細胞內的緩沖液，加入新鮮配置的CF647 conjugated- rCTB染色工作液。+4℃避光孵育30min。 3.4用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA清洗細胞三次； 3.5用4%多聚甲醛固定細胞，+4℃避光固定15min。 3.6用PBS清洗細胞二次，之后進行成像或接著做后續的染色?！咀ⅲ焊鶕嶒炐枨?，考慮是否加入核復染劑-Hoechst 33342等】
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附錄I幾款CF染料的光譜特征
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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