Pollen Viability Test Kit (Peroxidase Assay)

花粉活力檢測試劑盒（過氧化物酶法）

產品信息

應用背景

花粉活力的大小直接影響授粉、受精過程，與植物的產量密切相關，通過花粉活力的測定，可了解花粉的可育行，并掌握不育花粉的形態、生理特征，花粉活力的檢測方法常用的有：花粉萌發測定法、碘-碘化鉀（I2-KI）染色法、TTC染色法、過氧化物酶檢測，MTT、FDA等方法。

產品描述

過氧化物酶（Peroxidase）是常用的花粉活力染色法之一，工作原理在于：花粉中含過氧化物酶?；盍Ω叩幕ǚ圻^氧化物酶活性也高，過氧化物酶與氧化劑（比如：過氧化氫）形成一種復合物 ，復合物中的過氧化氫被活化，從而能氧化酚類化合物。根據顏色變化可判斷花粉的活力。

試劑盒組成

注意事項

1） 本品開蓋后請盡快使用，否則效率會下降。如果溶液變成紅色，需棄用。

2） TTC染色液對人體有輕微刺激性，請注意小心防護；

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存與運輸方法

保存：-20℃~+4℃保存，具體組分按照標簽要求來保存。12個月有效。

運輸：冰袋運輸。

操作方法【詳見懋康網站整理】

2.1配制氧化劑工作液：取適量的氧化劑，按氧化劑：蒸餾水=1：99的比例混合，即得到氧化劑工作液。

本氧化劑工作液+4℃保存，3個月有效。需注意，氧化劑有腐蝕性，小心操作，做好防護工作。

2.2取成熟將要開放的新鮮花朵，小心去除花瓣和雌蕊。

2.3將花粉物質置于潔凈載玻片上，分別滴加配制好的芳香胺顯色液、氧化劑工作液各1滴，混勻，蓋上蓋玻片。

【注】：染色時需將花粉完全浸沒于染色液中；

2.4 30℃恒溫箱孵育10~15min，低倍顯微鏡觀察著色情況，每片取5個視野。

2.5統計100?；ǚ鄣念伾?。

三、染色結果觀察：

活力強——紫紅色；

活力弱——淡紅色；

無活力或不育——無色。

計算：觀察并統計100?；ǚ?，計算有活力花粉的百分數，其公式為：

花粉活力百分數（%）=有活力花粉數/100 ×100%

染色示例（來自文獻，僅做參考）

文獻來源1）Li M, Jiang F, Huang L, Wang H, Song W, Zhang X, Zhang Y, Niu L. Optimization of In Vitro Germination, Viability Tests and Storage of Paeonia ostii Pollen. Plants (Basel). 2023 Jun 27;12(13):2460. doi: 10.3390/plants12132460. PMID: 37447022; PMCID: PMC10346979.

試驗對象：鳳丹（Tree peony (Paeonia ostii)）

試驗目的：比較九種不同的花粉活力檢測方法，包括：MTT、醋酸洋紅、TTC、I2-KI、benzidine-H2O2、 過氧化物酶、亞甲基藍、FDA等，來鑒別有活力和無活力花粉。

試驗結果：

Fig.Comparison of the nine staining methods of Paeonia ostii pollen grains. (A) MTT staining method; (B) Acetic carmine staining method; (C) TTC staining method; (D) I2-KI staining method; (E) Benzidine-H2O2 staining method; (F) Peroxide staining method; (G) Methylene blue staining method; (H) Inorganic acid staining method, and (I) FDA staining method. Grey arrows indicate non-viable pollen; red arrows indicate viable pollen.

試驗結論：本課題中發現MTT、TTC、benzidine-H2O2、FDA能有效區分有活力和無活力花粉，其中，FDA染色結果與花粉萌發結果類似。

文獻來源2） Weng Z, Deng Y, Tang F, Zhao L, Zhao L, Wang Y, Dai X, Zhou Z, Cao Q. Screening and optimisation of in vitro pollen germination medium for sweetpotato (Ipomoea batatas). Plant Methods. 2023 Aug 29;19(1):93. doi: 10.1186/s13007-023-01050-w. PMID: 37644497; PMCID: PMC10463589.

試驗對象：紅薯（sweetpotato (Ipomoea batatas)）

試驗目的：花粉活力測定

試驗圖片：

Fig.Comparison of different pollen viability testing methods. (a) I2-KI, bar =?200 μm. (b) TTC, bar =?200 μm. (c) Magenta acetate, bar =?200 μm. (d) FDA, bar =?200 μm. (e, f) In situ germination, bar?=?500 μm. (g) In vitro germination, bar =?100 μm. (h) Active pollen rates measured by TTC, Magenta acetate, FDA and in vitro germination. Different letters indicate statistically significant differences (P?<?0.001), and error bars represent standard deviations

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