| 目錄號 | MF2495-1000UL | 售價 | 436.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 規格 | 10×100μl | 運輸溫度 | -80℃保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名稱 | Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell | 保存溫度 | 干冰運輸 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS號 | N/A | 有效期 | 1年 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 發根農桿菌感受態細胞 | 訂購數量 |
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產品簡介: Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態細胞
產品訂購： 更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 。網站：www.worley-valve.com.cn。
產品組分：
菌株描述 Lemo21(DE3)菌株是一種T7菌株，特別構建專門開發適用于困難蛋白的原核表達，包括：膜蛋白、毒性蛋白，以及具溶解性問題的蛋白。 Lemo21(DE3)不僅含BL21（DE3）的宿主特性，而且能對困難克隆進行可調控表達。這一可調控表達通過改變溶菌酶（lysY）水平來實現，溶菌酶是T7 RNA聚合酶的天然抑制劑。溶菌酶的水平（0-2,000μM）通過在表達培養物中添加L-鼠李糖來調節。當 Lemo21（DE3）在不含鼠李糖的情況下生長時，該菌株的表現與含 pLysS 的菌株相同。然而，添加鼠李糖即可調節目的蛋白的表達。對于難溶蛋白，調節表達水平有可能產生更可溶的正確折疊的蛋白。Lemo21(DE3)能同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，適用于PET，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。 菌株重要特征： 1） Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失，減少對重組蛋白的降解； 2） fhuA2突變，賦予菌株產生噬菌體T1抗性； 3） pLemo質粒（具氯霉素抗性）攜帶由鼠李糖誘導的T7溶菌酶表達框，實現目的蛋白的可調控表達； Lemo21(DE3)菌株基因型：fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ?hsdS / pLemo(CamR) 產品描述 本品是大腸桿菌Lemo21(DE3)菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率＞108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。
保存與運輸條件： 保存：-80℃保存，六個月有效。 運輸：干冰運輸。
注意事項 1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。 2） 最好在冰上融化感受態細胞。 3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。 4） 轉化高濃度質?；蚋咝蔬B接產物可相應降低最終用于涂板的菌量。 5） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到最低。 6） 產品包裝內含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。 7） 誘導時，IPTG濃度可選：0.1~2 mM。鼠李糖最佳濃度，誘導時間，溫度，IPTG濃度需自行優化。 8） 對毒性大的蛋白，在轉化感受態涂平板這一步應加入鼠李糖（1000 μM），以促進陽性菌落的形成，并且后面的所有步驟都應在培養基中加入鼠李糖。 9） Lemo21(DE3)菌株攜帶pLemo質粒，除復蘇培養基為無抗生素外，其余所用培養基、培養液均應含有34 μg/ml氯霉素，以防質粒丟失。 10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 1） 從-80℃冰箱取出感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。 2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。 3） 向每個離心管中加700 μl無菌的LB或2YT培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。 4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質粒篩選抗生素的LB或2YT固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養過夜。 【注意】： a）涂布用量可根據具體實驗調整。若預計的克隆較多，可直接吸取轉化產物涂布平板；若預計的克隆較少，則同上離心（5,000 rpm，1min）后留取適量培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。 b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。 c）Lemo21(DE3)菌株攜帶 pLemo質粒，除復蘇培養基為無抗生素外，其余所用培養基、培養液均應同時加入34 μg/ml氯霉素，以防質粒丟失。 相關產品
附表1 固體和液體LB培養基配方
附表2 固體和液體2-YT培養基配方
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。 |
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