Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)  

植物原生質體轉化試劑盒（PEG法）

產品關鍵詞：

Plant Protoplast 植物原生質體；PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介導的原生質體轉化；Yakult Honsha；Cellulase R-10纖維素酶R-10；Macerozyme R-10離析酶R-10；二乙酸熒光素(FDA) 原生質體活力檢測；

產品信息

【溫馨提示】：見我司（MKBio）整理的植物細胞壁降解酶/消化酶產品專題。

【溫馨提示】：MX7383僅含原生質體轉化所需的試劑，若需原生質體制備的話，請選擇MX7381或MX7382。

產品描述

原生質體（Protoplast）是指植物細胞去掉細胞壁后的裸露部分，體外培養條件下，具有以下功能：1）具全能型，可再生細胞壁，進行連續的細胞分裂且能再生成完整植株的能力；2）具攝取外源大分子、細胞器，以及細菌、病毒的能力，從而原生質體是進行遺傳操作，基因轉移的良好材料；3）通過同種和異種植物的原生質體融合，可產生異核體，實現體細胞雜交，從而培育出具有抗病原或更高產量的新品種。

原生質體（Protoplast）的制備最主流的技術是酶解法，因其具有消化溫柔，操作簡單，且良好維持原生質體完整性的特點。工作原理是根據植物細胞壁的結構特征選擇合適的酶進行處理，植物細胞壁主要由多糖（纖維素、半纖維素、果膠等）以及少量的蛋白和脂質構成。因此，通過使用纖維素酶、離析酶、半纖維素酶、果膠酶等復合酶來降解細胞壁，即可得到原生質體。

原生質體（Protoplast）的轉化方法很多，主要有PEG介導轉化法、電擊穿孔轉化法、脂質體介導轉化法、農桿菌共培養轉化法等。本試劑盒利用的是PEG介導的原生質體轉化法，利用PEG短時間內對原生質體產生的沖擊效應，促使質粒DNA、RNA或蛋白質進入原生質體，經轉化后的原生質體培養一段時間后，可用于檢測外源基因的表達或基因編輯效果等研究。本試劑盒操作簡單和便捷，含原生質體轉化需要的試劑，按照每次轉化100μl原生質體溶液，可做至少40次轉化。

試劑盒組分

保存與運輸方法

保存：-20℃保存，1年有效。 

運輸：室溫運輸。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 需要準備材料

二、 原生質體轉化

2.1按照以下表1，根據實際樣品量配制所需的即用型轉化溶液D，需在轉化開始前至少1h配制轉化溶液，以確保轉化試劑能充分的溶解。轉化溶液建議配制當天使用。配制好的轉化溶液于4℃保存3-5天內會維持相對較好的轉化效率，但與現配的轉化溶液相比，轉化效率會有一定程度的下降。

2.2取10μl質粒DNA（10-20μg，濃度為1-2μg/μl）于1.5ml離心管。

【注①】：質粒大小建議在5-10kb，質粒濃度建議在1-2μg/μl。原生質體轉化對質粒的純度要求較高，盡量使用高純質粒。多個質粒同時轉化時的體積和總質量保持不變。多個質粒轉化時，每種質粒的用量比例，根據實際情況自行調整。

2.3 加入100μl原生質體溶液（原生質體密度為2×105個/ml，約2萬個原生質體），輕柔混勻。

2.4 加入等體積（110μl）新鮮配制的即用型轉化溶液D，輕柔完全混勻，室溫25℃孵育5-15min，間歇輕柔混勻。

【注①】：通常孵育5min足夠，但需要根據實際體系來優化調整，最長孵育15min。

2.5 加入2倍體積（440μl）溶液B，輕柔完全混勻，終止轉化過程。

2.6 于100×g，室溫離心1-2min，吸掉上清。

【注①】：由于轉化后的溶液非常粘稠，加入溶液B后離心1min通?？梢允沟迷|體聚集在管底，但是，使用某些突變體時為了減少原生質體損失，可以延長離心時間到2min。

2.7 加入500μl溶液B輕輕重懸原生質體，于100×g，室溫離心1min，吸掉上清。此步目的是為了充分去除轉化液內殘留組分，避免后續可能產生的負面影響。

2.8 將沉淀重懸于1ml溶液E中，輕柔混勻。

三、 原生質體培養和收集

3.1 將離心管水平放置，于25℃弱光培養2-16h。

【注①】：根據特定實驗確定孵育時間。RNA分析一般孵育2-6h；酶活性分析和蛋白標記一般孵育2-16h?；蚓庉嬓Ч赡茉?4h后被檢測到。

3.2 【可選】于100×g，室溫離心2min收集原生質體，去掉大部分上清。

3.3 【可選】原生質體沉淀重懸于剩余溶液中，-80℃保存。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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