DRAQ7 (0.3mM) 遠紅外DNA染料

產品標簽

DRAQ7；DRAQ5；Anthraquinone dye 蒽醌染料；DNA染料；7-AAD；碘化丙啶（PI）；細胞活力分析；TMRM 線粒體膜電位探針；

產品信息

產品描述

DRAQ7是一種不具細胞通透性的遠紅外DNA染料，僅對死細胞和透化細胞的核染色，能與其它常見的標記染料（比如：GFP或FITC）聯合使用。DRAQ7是一種理想工具用于研究死細胞或膜受損細胞，因其不用進入完整膜結構的活細胞。DRAQ7是碘化丙啶（PI）和7-AAD的理想替代品，因其不能被紫外激發，且與PE/PE同源物沒有發射光重疊。

DRAQ7的關鍵特征包括：1）快速染色死細胞或透化細胞的dsDNA/核；2）低光漂白；3）適用于絕大多數細胞，真核和原核來源：哺乳動物、細菌、寄生蟲、植物等；4）長期培養無毒性；5）能與活細胞染料結合使用；6）流式細胞檢測中與常見的FITC/GFP+PE結合實驗無需做熒光補償；7）不用清洗或RNase處理；

染料特性

1）   外觀：液體（0.3mM）

2）   激發波長：最理想633和647nm處（Eλmax= 599/644nm）； 次理想488，514，568nm處（僅適用于流式分析）

3）   發射波長（取決于儀器）：665nm至紅外（Emλmax= 678nm/697nm，摻入 dsDNA）

          與可見光區比如：GFP和FITC，最小重疊；發射濾片可能包括：695L, 715LP 或780 LP

3）與紫外/可見光熒光素的多波長成像：與DNA結合后沒有熒光增強；低光漂白效應；兼容于流式細胞儀、激光掃描細胞儀和共聚焦顯微鏡的光學；以及基于燈泡的熒光顯微鏡。

保存與運輸方法

保存：2-8°C避光保存，2年有效。不可凍存！

運輸：室溫運輸。

注意事項

1）DRAQ7是Biostatus Limited的商標名。

2）熒光染料都存在淬滅的問題，保存和操作過程中注意避光。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

染色步驟（懸浮細胞的活力染色）

1）對于每個樣本，用PBS重懸細胞使其密度約為5×105細胞/ml。疊氮鈉影響DRAQ7染色，建議用PBS（不含鈣鎂或疊氮鈉）或細胞培養基（不含疊氮鈉）來染色。

2）加入適量DRAQ7（0.3mM）到所需濃度。推薦做濃度滴定來確定最佳的工作濃度。用于流式細胞儀和顯微成像檢測，通常1:100的稀釋倍數（3μM）能獲得良好的染色結果。

3）室溫避光孵育10-15min。不需清洗。

4）流式細胞儀分析。對于流式分析，當使用藍色激光器激發，染料用PerCP-Cy5.5或PerCP-eFluor 710的濾片設置來觀察；當使用紅色激光器激發，染料用Cy5的BP或LP濾片設置來觀察。另，當進行熒光顯微鏡分析，最好用黃-紅光激發。用比如：695L, 715LP 或780 LP的遠紅長通濾片來觀察。

延伸閱讀（DRAQ7的動力學活力分析）

文獻來源：Wlodkowic D, Akagi J, Dobrucki J, et al. Kinetic viability assays using DRAQ7 probe. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:10.1002/0471142956.cy0941s65. doi:10.1002/0471142956.cy0941s65

實驗1）DRAQ7實時染色（Real-time DRAQ7 staining）

①在合適的容器比如微量滴定板或細胞培養瓶內接種或分散細胞到培養基；

②加10μl DRAQ7儲存液（濃度：300μM）到每1000μl細胞懸液（染料終濃度為3μM）；

③輕輕混勻使染料均勻分散在溶液內；

④在含DRAQ7的情況下使細胞生長高達5天（37℃，5% CO2）；

⑤定期收集染色樣本用于流式分析；【細胞體積至少符合流式細胞儀分析要求的最低樣本體積100-150μl】；

⑥不用清洗直接用流式細胞儀分析，用488nm激發器或633-647nm激發器，發射波長>660 nm。

關于DRAQ7的重要信息：DRAQ7培養高達5天對人細胞系無毒性，在高達20μM DRAQ7的體系內培養細胞，對細胞增殖、細胞周期、活力無明顯干擾，且對藥物比如抗腫瘤化合物或凋亡誘導劑沒有反應。

結果呈現：

Figure 1 Assessment of live, early apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on stainability with plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. forward scatter (FS) enable discrimination of live (DRAQ7?; green gate), early apoptotic (DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter.

實驗2）DRAQ7和線粒體膜電位敏感探針TMRM雙重實時評估細胞死亡（Two color real-time assay with DRAQ7 and TMRM）

①在合適的容器比如微量滴定板或細胞培養瓶內接種或分散細胞到培養基；

②加10μl DRAQ7儲存液（濃度：300μM）到每1000μl細胞懸液（染料終濃度為3μM）；

③加15μl TMRM工作液（濃度：10μM）到每1000μl細胞懸液（染料終濃度為150nM）；

④輕輕混勻使染料均勻分散在溶液內；

⑤在含DRAQ7和TMRM兩種染料的情況下使細胞生長高達5天（37℃，5% CO2）；

⑥定期收集染色樣本用于流式分析；【細胞體積至少符合流式細胞儀分析要求的最低樣本體積100-150μl】；

⑦不用清洗直接用流式細胞儀分析，用488nm激發器和633-647nm激發器，發射波長分別搜集575nm（TMRM）和>660 nm（DRAQ7）的信號。

重要信息：DRAQ7和TMRM兩種染料都能被488nm激發器激發。兩者相鄰通道間的光譜重疊很小，如兩者都用488nm激發器來激發，可能需做一些小補償調整。DRAQ7熒光能用標準APC 660nm寬帶濾片觀察，當用633nm激發器來激發，避免使用任何熒光補償。調整對數放大尺度來區分活細胞（明亮的TMRM+/DRAQ7?）、凋亡細胞（TMRMlow/DRAQ7?）、具受損質膜的晚期凋亡/壞死細胞（TMRMlow/DRAQ7+）。在一些細胞體系，可能有必要優化DRAQ7和TMRM濃度，以及PMT電壓在不同的細胞時間中獲得最大的分辨率。

Figure 2 Discrimination of viable, apoptotic and late apoptotic/necrotic cells based on Δψm marker

 tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) and plasma membrane permeability marker DRAQ7. Analysis was based on real-time labeling of THP-1 cells with 3 μM of DRAQ7 and 150 nm of TMRM. Bivariate dot plots DRAQ7 vs. TMRM enable discrimination of live (TMRM+/DRAQ7?; green gate), early apoptotic (TMRMlow/DRAQ7dim; blue gate) and late apoptotic/necrotic (TMRMlow/DRAQ7+; red gate) subpopulations. DRAQ7 probe was excited using 633 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 660 nm long-pass filter. TMRM was excited using 488 nm laser and logarithmically amplified fluorescence signals were collected using 575 nm long-pass filter. Debris signals were excluded electronically by setting the proper low threshold.

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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