TOP10F` Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

TOP10F`；TOP10；F′附加體（F′ episome）；F-TOP10；IPTG；卡那霉素；鏈霉素；

產品訂購： 更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，電話：021-54736159 。網站：www.worley-valve.com.cn。

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產品組分：

菌株描述

TOP10F`菌株來源于TOP10菌株，除了F′附加體（F′ episome）的引入。F′附加體攜帶四環素抗性基因，使其能從攜帶f1復制子的載體中純化單鏈DNA。F′附加體還攜帶lacI<sup>q</sup>抑制子，參與IPTG作為誘導劑對trc，tac和lac啟動子的誘導表達。TOP10F`菌株進行藍白斑篩選，需要IPTG誘導β-半乳糖苷酶基因的表達。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。適用于高效克隆和質粒擴繁。

TOP10F`菌株基因型：F′{lacIq Tn10 (Tet^R)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

產品描述

本品是大腸桿菌TOP10F`菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，經pUC19載體檢測轉化效率＞10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上融化感受態細胞。在冰上融化后立即加入目標DNA，不可在冰上放置時間過長。長時間存放會降低轉化效率，混入目的DNA時需輕柔操作。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到最低。

5） 產品包裝內含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1.1 將TOP10F`感受態細胞從-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物），并用手撥打管底輕輕混勻，冰中靜置25min。

1.2 42℃水浴熱激45s，迅速放回冰上并靜置2min。 此過程不要搖動離心管。

1.3 向每個離心管中加入700 μl無菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

1.4 低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之后倒置放于37℃過夜培養。如果進行藍白斑篩選，37℃至少培養13h。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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